[發明專利]一種酶法制備β-煙酰胺單核苷酸的方法

有效

• 申請號: 201611245619.4
• 申請日: 2016-12-29
• 公開（公告）號: CN106755209B
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: 陶軍華;付敏杰;梁曉亮
• 申請（專利權）人: 蘇州漢酶生物技術有限公司
• 主分類號: C12P19/30
• 分類號: C12P19/30;C12R1/19;C12R1/84;C12R1/865
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 孫仿衛;李萍

本發明涉及一種酶法制備β?煙酰胺單核苷酸的方法，該方法以煙酰胺核糖為底物，在磷酸基供體存在下，在煙酰胺核糖激酶和/或含有煙酰胺核糖激酶的重組細胞的催化下反應生成β?煙酰胺單核苷酸。本發明提供的酶法制備β?煙酰胺單核苷酸的方法具有重要的應用價值。與已有化學合成β?煙酰胺單核苷酸的技術相比，本發明方法更加環保，成本更低，且可提供純度更高的產品，因而能更經濟的用于保健品及生物醫藥領域。

技術領域

本發明涉及一種β-煙酰胺單核苷酸的制備方法，特別涉及一種β-煙酰胺單核苷酸的生物制備方法。

背景技術

β-煙酰胺單核苷酸是一種近年來受到廣泛研究和關注的保健品，也是用來合成煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（輔酶I）的關鍵中間體。據報道β-煙酰胺單核苷酸在抗衰老（參見JNutr Sci Vitaminol (Tokyo). 2016;62(4):272-276），治療糖尿病（Cell Metab. 2011Oct 5; 14(4): 528–536）等方面有巨大潛力，在日本和美國均有相關的保健品上市銷售。

傳統的β-煙酰胺單核苷酸生產方法是以煙酰胺核糖為原料，用三氯氧磷進行磷酸化得到（參見Chem. Commun. 1999, 729–730），得率低，產品純度低，而且用到大量的有機溶劑，對環境破壞嚴重，其中三氯氧磷是比較危險的試劑。

發明內容

針對上述問題，本發明的目的是提供一種酶法制備β-煙酰胺單核苷酸的方法，該方法可以較低的成本、較短的周期生產出高純度的β-煙酰胺單核苷酸產品，并且對環境污染相對傳統方法大為減少。

為達到上述目的，本發明采用的技術方案如下：

一種酶法制備β-煙酰胺單核苷酸的方法，該方法以煙酰胺核糖為底物，在ATP等磷酸供體存在下，在煙酰胺核糖激酶和/或含有煙酰胺核糖激酶的重組細胞的催化下反應生成β-煙酰胺單核苷酸。

優選地，本發明所用的煙酰胺核糖激酶來自釀酒酵母（Saccharomycescerevisiae）。

更優選地，煙酰胺核糖激酶的氨基酸序列可以與序列表中的序列2具有至少80%的一致性。進一步地，煙酰胺核糖激酶的氨基酸序列與序列表中的序列2具有至少90%的一致性。更進一步地，煙酰胺核糖激酶的氨基酸序列與序列表中的序列2完全一致。

根據本發明，可以使所述反應在溫度4℃~50℃以及pH 5.0~9.0的水相體系中進行。優選地，使所述反應在溫度30℃~45℃以及pH 7.5~8.5的水相體系中進行。

更優選地，使反應在溫度33℃下進行。

更優選地，使反應在pH 8.0下進行。

根據一個具體優選方面，使反應在pH 8.0的三乙醇胺緩沖液中進行。

根據本發明，所述的反應在含有煙酰胺核糖激酶的重組細胞的催化下進行，所述的重組細胞可以且優選為微生物細胞，其中微生物可以且優選為大腸埃希氏桿菌、釀酒酵母或畢赤酵母等。

根據一個具體和優選方面，所述方法實施如下：將反應所用的全部原料加入到反應釜中，混合均勻后，置于設定溫度下，攪拌反應。反應完畢后，通過提純處理即可獲得達到使用要求的β-煙酰胺單核苷酸產品。一個具體的提純方法是經包括樹脂分離在內的后處理，按照該提純方法，可獲得純度高達95%以上的β-煙酰胺單核苷酸產品。

本發明采用上述技術方案，相比現有技術具有如下優點：

本發明提供的酶法制備β-煙酰胺單核苷酸的方法具有重要的應用價值。目前的化學方法產生的污染嚴重，所涉及的反應物在儲存和使用時都有危險性。化學方法反應得到的產品雜質多，難于純化。相比之下，采用本發明的酶法合成方法能夠提供純度更高的產品，對環境更友好，便于純化，因而能更經濟的用于保健品、醫藥等領域，而且將會進一步擴大其應用范圍。

具體實施方式