[發明專利]一種稻瘟病菌抑制劑的制備方法

有效

• 申請號: 201611245385.3
• 申請日: 2016-12-29
• 公開（公告）號: CN106755117B
• 公開（公告）日: 2020-07-31
• 發明（設計）人: 徐正君;戎松浩;官穎;董逸倫;徐洪;趙露;李輝;高曉玲;李利華;陳榮軍
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: C12P1/00
• 分類號: C12P1/00;A01N63/00;A01P3/00
• 代理公司: 成都天嘉專利事務所(普通合伙) 51211
• 代理人: 史姣姣

本發明提供一種稻瘟病菌抑制劑的制備方法，包括下述步驟：A、將新鮮的木樨果清洗、將果肉部分研磨至勻漿狀，用無菌水稀釋后涂布于培養，并用對峙法篩選出對稻瘟病菌有抑制活性的菌，并選取一株抑菌效果好的備用；B、將步驟A中選取的抑菌效果好的菌株或是其種子液接種于PDB液體發酵培養基中搖床恒溫培養，得到發酵液，C、將步驟B得到的發酵液減壓濃縮至膏狀，然后加入無水硫酸鈉去除水，最后用無水甲醇對膏狀物進行洗脫得到洗脫液，收集洗脫液得到稻瘟病菌抑制劑。該方法得到稻瘟病菌抑制劑，具有活性強、純度高的優點，為稻瘟病的防治提供綠色、環保的手段，且本發明得到的稻瘟病菌抑制劑可直接用于實驗研究。

技術領域

本發明涉及微生物發酵液活性成分的提取領域，具體涉及一種稻瘟病菌抑制劑的制備方法。

背景技術

稻瘟病又稱稻熱病是水稻三大病害之一，水稻植株的地上部分均會感染稻瘟病，根據其感染部位的不同，可將其分為苗瘟、節瘟、葉瘟、穗頸瘟和谷粒瘟等。

稻瘟病病菌以分生孢子或菌絲體形態在稻草或稻谷上越冬。當氣溫條件在20℃左右時，開始解除休眠，如果遇到適宜的濕度就可以產生大量的分生孢子。分生孢子主要借由空氣、水、昆蟲進行傳播。當條件適宜時，孢子便于水稻上萌發并侵入水稻細胞，形成病株。借此機會稻瘟病便可快速繁殖，產生病斑，形成新的分生孢子，由病株向周圍進行侵染擴散，將稻瘟病蔓延開來。

稻瘟病在所有的水稻生產和種植中，為真菌病里危害面積最廣，危害性最大的。在稻瘟病流行的年份，重病區一般減產10~20％，嚴重區域減產40~50％甚至顆粒無收。從全球范圍來計算，因為稻瘟病的存在，每年的糧食損失甚至高達1.57億噸。

水稻抗性品種的選育和化學農藥的施用對稻瘟病的防治仍然具有很重要的作用，同時因為抗稻瘟品種效果提升的速度減緩，以及化學試劑的毒性、病原菌抗藥性的問題，這兩者在對稻瘟病的防治效果上在不斷削弱。生物防治及生物農藥的研究和開發在這種背景下變的逐漸重要起來，植物源、微生物源的生物農藥具有顯著地防治特性，對環境的壓力和沖擊力同化學防治相比，顯得更加的平和，對環境的壓力較小能有效減弱稻瘟病菌抗藥性對試劑的耐受效果，同時延長產品的使用時間。

我國植物資源豐富，從天然植物中尋找新的低毒、高效的稻瘟病菌抑制劑一直是國內外的研究熱點。公開號為CN101805715A的發明申請公開了一種用地衣芽孢桿菌提取的活性成分及其應用，活性成分提取步驟：生產菌株為地衣芽孢桿菌(BacilluslicheniformisN27)，保藏號：CGMCCNo：3585；將B.licheniformisN27用液體發酵，培養基為：馬鈴薯200g、葡萄糖20g、水1000ml；發酵條件為：溫度25～32℃、轉速為150～250rpm，搖床培養2～5天；所得發酵液減壓濃縮得粗浸膏；粗浸膏依次用硅膠H、C18、SephadexLH～20分離得到活性成分Z。該發明的活性成分是具有能使在常規培養基下培養的真菌高效、快速形成厚垣孢子的代謝物，且用量少，應用于生物農藥制備中。

發明內容

本發明提供一種稻瘟病菌抑制劑的制備方法，該方法從木樨果中篩選出具有抑制稻瘟病的菌株，并將菌株的發酵液經濃縮、除水、洗脫處理，得到稻瘟病菌抑制劑，具有活性強、純度高的優點，為稻瘟病的防治提供綠色、環保的手段，且本發明得到的稻瘟病菌抑制劑可直接用于實驗研究。

一種稻瘟病菌抑制劑的制備方法，包括下述步驟：

A、抑稻瘟病菌的菌株的篩選：將新鮮的木樨果清洗、消毒后剔除種子，將果肉部分研磨至勻漿狀，果實勻漿用無菌水稀釋后涂布于PDA培養基上， 28℃恒溫培養箱培養1～2天，挑選單菌落用對峙法篩選出對稻瘟病菌有抑制活性的菌，并選取一株抑菌效果好的備用；