[發明專利]一種表達藻藍膽素的基因工程菌株及其構建方法和應用

在審

• 申請號: 201611244066.0
• 申請日: 2016-12-29
• 公開（公告）號: CN106834198A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發明（設計）人: 臧曉南;肖東芳;張學成;徐滌;吳非;張冉;馮小亭;衣俊杰
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12N15/66;C12P17/16;C12P21/02;C12R1/19
• 代理公司: 青島致嘉知識產權代理事務所(普通合伙)37236
• 代理人: 單虎

1.一種表達藻藍膽素的基因工程菌株H(314)P(314)，其特征在于：其分類命名為大腸埃希氏菌 Escherichia coli，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏編號為CGMCC No.12909。

2.根據權利要求1所述的表達藻藍膽素的基因工程菌株H(314)P(314)，其特征在于：所述菌株H(314)P(314)含有如序列表SEQ ID No：1序列所示的hoxⅠ基因。

3.根據權利要求2所述的表達藻藍膽素的基因工程菌株H(314)P(314)，其特征在于：所述hoxⅠ基因來源于節旋藻Arthrospira platensis FACHB314。

4.根據權利要求1所述的表達藻藍膽素的基因工程菌株H(314)P(314)，其特征在于：所述菌株H(314)P(314)含有如序列表SEQ ID No：3序列所示的pcyA基因。

5.根據權利要求4所述的表達藻藍膽素的基因工程菌株H(314)P(314)，其特征在于：所述pcyA基因來源于節旋藻Arthrospira platensis FACHB314。

6.根據權利要求1所述的表達藻藍膽素的基因工程菌株H(314)P(314)，其特征在于：所述菌株H(314)P(314)經IPTG誘導表達呈現藍綠色，在580-590nm激發波長下，在635-645nm處發射熒光。

7.權利要求1所述的表達藻藍膽素的基因工程菌株H(314)P(314)的構建方法，其特征在于所述構建方法包括以下步驟：

（1）克隆節旋藻Arthrospira platensis FACHB314的hoxⅠ基因和pcyA基因，并將其連入克隆載體pMD19-T中，分別獲得質粒pMD19T-hoxⅠ(314)和pMD19T-pcyA(314)；

（2）將所述質粒pMD19T-hoxⅠ(314)用BamHI和SacI進行雙酶切，所述質粒pMD19T-pcyA(314)用SacⅠ和SalⅠ進行雙酶切，回收目的片段hoxⅠ(314)基因和pcyA(314)基因，并將二者連接入pET24a(+)表達載體中，構建出重組表達質粒pET24a-hoxⅠ(314)-pcyA(314)；

（3）將所述質粒pET24a-hoxⅠ(314)-pcyA(314)轉化入E.coliBL21(DE3)表達菌株，得到重組基因工程菌株H(314)P(314)。

8.權利要求1所述的表達藻藍膽素的基因工程菌株H(314)P(314)在用于制備藻藍膽素中的應用。

9.根據權利要求8所述的表達藻藍膽素的基因工程菌株H(314)P(314)在用于制備藻藍膽素中的應用，其特征在于：將含藻藍蛋白α與β亞基基因及色基裂合酶cpcE與cpcF基因的質粒載體pACYCDuet-uBAEF轉化入所述重組基因工程菌株H(314)P(314)，獲得重組表達菌株H(314)P(314)BAEF。

10.根據權利要求9所述的表達藻藍膽素的基因工程菌株H(314)P(314)在用于制備藻藍膽素中的應用，其特征在于：所述重組表達菌株H(314)P(314)BAEF的重組藻藍蛋白表達量達1.08 mg/ml以上，獲得的此重組藻藍蛋白在580nm激發波長下，在640nm處發射出藻藍蛋白的特征熒光峰，且單位質量重組藻藍蛋白發射出的熒光強度達140000。