[發明專利]一種基于角蛋白自熒光作為預測檢測腫瘤的生物標志物的檢測方法及其應用

在審

• 申請號: 201611243592.5
• 申請日: 2016-12-29
• 公開（公告）號: CN106841131A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發明（設計）人: 殷衛海;張銘超
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司31213
• 代理人: 龔敏

技術領域

本發明涉及預測和檢測腫瘤組織的生物標志物，具體是基于檢測腫瘤組織中角蛋白自熒光變化，作為預測和檢測腫瘤位置的生物標志物的檢測方法及其應用。

背景技術

在上皮細胞中，根據不同的細胞種類，分化程度和功能狀態，都會有特殊的角蛋白表達。事實表明，在腫瘤中，上皮腫瘤細胞很大程度上保留了原先的角蛋白的亞型。根據這個角蛋白已經被用來作為鑒別腫瘤細胞來源的標志物，其中最常用的是腺癌。

現在全球早期發現癌癥的關鍵在于腫瘤篩查的方法。目前已有的檢查方法包括體檢各種血液指標，B超、X光、肛門直腸指檢，婦科體檢中的巴氏涂片、乳腺鉬鈀攝片等。同時在臨床上，手術過程中如何迅速判斷腫瘤組織是否被徹底切除，還有著重大的臨床意義。

現在臨床上手術中主要使用切片染色，判斷腫瘤組織手否被切除完全。這種方法不僅需要等待很長時間，而且不能完全確定是否腫瘤組織已經被完全切除。

有研究發現，一些內皮惡性腫瘤組織中角蛋白1含量顯著增加。而至今沒有無創檢測組織中角蛋白1含量的方法。

所以，急需一種實時檢測腫瘤組織的方法。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足，本發明基于紫外可以誘導角蛋白1自熒光的上升這一全新發現，突破了現有技術的難題，找到了一種可以準確地迅速地檢測惡性腫瘤組織的生物標志物。并且基于該生物標志物，發明了新的無創檢測腫瘤組織的方法。

本發明的具體技術方案是：

一種基于角蛋白自熒光作為預測檢測腫瘤的生物標志物的檢測方法，包括以下步驟：

(1) 在實驗對象的腫瘤組織受到包含一定劑量紫外光的光源照射后24小時之內，檢測所述實驗對象經過含紫外光的光源照射的腫瘤組織中角蛋白的自熒光，其中所述劑量 = 紫外光功率×照射時間；

(2) 檢測所述實驗對象經過含紫外光的光源照射的腫瘤組織所發出的波長在490-640nm范圍內的自發熒光強度；

(3) 按照所述步驟(2)的方法，同樣檢測所述實驗對象受到含紫外光的光源照射的腫瘤區域附近組織的自熒光強度；

(4) 將所述實驗對象經過含紫外光的光源照射的腫瘤組織自熒光和受到含紫外光的光源照射的腫瘤區域附近組織的自熒光強度相對比，獲得經紫外光照射誘發的自發熒光強度變化率；

(5) 根據所述經紫外光照射誘發的角蛋白自熒光強度變化率，預測檢測所述被實驗對象的惡性腫瘤組織位置。

進一步的，所述腫瘤組織包括肺、肝臟、腎、前列腺、子宮、皮膚等部位的腫瘤。

進一步的，所述腫瘤類型為腺癌和皮膚癌。

進一步的，所述腫瘤組織包括肺、肝臟、腎、前列腺、子宮、皮膚等部位的腫瘤。

進一步的，所述檢測樣本中角蛋白1自熒光的的方法中，通過一定劑量的紫外光刺激的作用是，放大角蛋白1自熒光的信號。紫外光劑量小于等于100焦耳/平方厘米之間。

進一步的，所述利用激發光激發角蛋白1自熒光的方式包括使用普通的連續光輸出進行激發的方式、使用電調制進行調制激發的方式或者使用脈沖激光進行激發的方式中的至少一種。

進一步的，所述角蛋白1自熒光特征在于光譜范圍在400-600nm。

進一步的，所述角蛋白1自熒光特征在于光譜范圍在450-550nm。

進一步的，所述角蛋白1自熒光特征在于光譜范圍在460-500nm。

本發明還提供一種基于檢測角蛋白1自熒光變化預測檢測惡性腫瘤組織的生物標志物的應用。

本發明利用惡性腫瘤組織中角蛋白1自熒光強度顯著高于正常組織這一現象，為臨床檢測惡性腫瘤組織建立基礎，可以準確且迅速的發現惡性腫瘤組織，使患者得到及時的治療。既可以在高端精密的醫學診斷中得到應用，也可以在便捷、家庭中預測和檢測紫外損傷中得到應用，非常利于普及。

附圖說明

圖1：組織中角蛋白1自熒光光譜圖。

圖2：角蛋白1RNA干擾對于紫外光誘導的組織自熒光的作用圖。

圖3：角蛋白1RNA干擾對于紫外光誘導的黑素瘤細胞自熒光的作用圖。

具體實施方式

使用雄性C57小鼠，紫外光處理后，小鼠在動物房中進行飼養，條件為22-24℃，12小時的明/暗循環，并可自由進食取水。6小時后，使用激光共聚焦顯微鏡對皮膚中角蛋白1自熒光進行成像。其中激光共聚焦顯微鏡的激發波長為440-600 nm。