[發(fā)明專利]檢測糖酵解相關(guān)基因的產(chǎn)品在制備鼻咽癌診斷試劑盒中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611240543.6
• 申請日: 2016-12-29
• 公開（公告）號: CN106755435B
• 公開（公告）日: 2020-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王暉;趙宇
• 申請（專利權(quán)）人: 王暉
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及檢測糖酵解相關(guān)基因的產(chǎn)品在制備鼻咽癌診斷試劑盒中的應(yīng)用。所述糖酵解相關(guān)基因分別為GCK基因、HK2基因及HIF1?α基因，所述試劑盒包括PCR引物、DNA標準品及PCR反應(yīng)液，所述PCR引物包括針對GCK、HK2及HIF1?α相應(yīng)位點的引物組，所述DNA標準品包括突變型標準品DNA及野生型標準品DNA，所述PCR反應(yīng)液包括PCR Buffer，MgCl2，dNTP及Taq酶。本發(fā)明通過結(jié)合多重PCR技術(shù)、單堿基延伸技術(shù)和基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時間質(zhì)譜分析技術(shù)進行基因分型檢測，具有檢測結(jié)果準確、特異性高、檢測周期短、檢測方法靈敏的優(yōu)點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及體外核酸檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及檢測糖酵解相關(guān)基因的產(chǎn)品在制備鼻咽癌診斷試劑盒中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma，NPC)是一種源于鼻咽上皮的高度侵襲性的惡性腫瘤。據(jù)統(tǒng)計，在2012年，鼻咽癌新發(fā)病例86,700人，死亡病例50,800人，因此其被認為是全球范圍內(nèi)較罕見的惡性腫瘤。但在流行區(qū)域，包括中國南方和東南亞，鼻咽癌的發(fā)病率可達到15-50/100000。鼻咽的解剖部位較深，周圍臨近許多重要的血管和神經(jīng)，特殊的解剖位置及局部侵襲生長的生物學(xué)行為使得手術(shù)治療難以實現(xiàn)；而大部分鼻咽癌的病理類型對放射線較敏感，目前鼻咽癌公認有效的治療手段為放射治療。早期的鼻咽癌患者采用單純放射治療有較為理想的效果，但由于鼻咽癌早期癥狀不明顯，大部分患者在就診時已是中晚期，腫瘤組織已向周圍侵犯，甚至發(fā)生了遠處轉(zhuǎn)移，因此單純放療治療鼻咽癌的總生存率并不理想。中晚期鼻咽癌患者由于較高的局部復(fù)發(fā)率和遠處轉(zhuǎn)移率導(dǎo)致總體生存率明顯降低，為提高患者總生存率，化療已經(jīng)被應(yīng)用于鼻咽癌的綜合治療之中。盡管目前NPC治療取得了令人欣喜的進步，但由于鼻咽癌早期癥狀不明顯及易于局部侵襲及遠處轉(zhuǎn)移的生長方式，使得很多患者就診時已處于中晚期，此類患者治療效果較早期患者差距明顯。

因此，找到有效的用于NPC臨床診治的分子標志物，對于患者早診早治，提高生存時間具有重要意義。

腫瘤細胞重編碼代謝以促進增殖生長及長期生存。這一重編碼的代謝過程的最主要特征是增加的葡萄糖攝取及發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)生乳酸，即使在有足夠的氧氣及正常的線粒體功能情況下也會發(fā)生。這被稱為Warburg效應(yīng)。這一效應(yīng)有可能是對惡性腫瘤早期發(fā)生發(fā)展過程中間接性缺氧的適應(yīng)。增強的糖酵解會損失線粒體大量產(chǎn)能，但內(nèi)環(huán)境的改變的同時也促使腫瘤細胞更加抵抗酸中毒、提供生物合成大分子的原料、及保護細胞免于氧化應(yīng)激損害。

單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphism,SNP)是在人群中具有一定的頻率(1％)的變異，確切的講，是基因組中由于單個堿基變異(包括插入、替換、缺失)造成DNA序列發(fā)生了改變，從而使得人類基因組更具有多樣性。許多研究已經(jīng)表明，諸多基因的SNP與包括腫瘤在內(nèi)的多種疾病的發(fā)生發(fā)展、預(yù)后以及治療敏感度密切相關(guān)，這提示SNP有潛力被應(yīng)用到臨床進行相關(guān)疾病的預(yù)防、篩查、診斷以及指導(dǎo)治療，這對于個體化治療及精準治療具有非常重要的意義。

目前，已有諸多研究顯示糖酵解通路基因SNP與多種腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，但糖酵解通路基因改變與鼻咽癌風(fēng)險相關(guān)至今尚未被研究過?；诖?，以鼻咽癌的糖酵解通路關(guān)鍵基因為切入點，對糖酵解途徑己糖激酶2(Hexokinase2，HK2)、乏氧誘導(dǎo)因子-1α(Hypoxia Inducible Factor-1α，HIF-1α)、葡萄糖激酶(Glucokinase,GCK),乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase,LDH)4個關(guān)鍵基因的30個標簽SNP進行檢測，這對建立新的鼻咽癌風(fēng)險篩查技術(shù)有重要意義，能夠早期、靈敏和穩(wěn)定的篩查鼻咽癌患病風(fēng)險，以便進行及時、有效的監(jiān)測評估及干預(yù)，降低醫(yī)療成本，節(jié)約社會資源。

目前，醫(yī)院內(nèi)針對鼻咽癌的診斷主要還是依賴于傳統(tǒng)的病理學(xué)常規(guī)方法，早期診斷率較低且對于鼻咽癌的預(yù)防效果較差；此外，尚未有針對所述糖酵解相關(guān)基因GCK、HK2及HIF1-α的測序引物及相應(yīng)檢測試劑盒面世，因此，本發(fā)明的出現(xiàn)，對于鼻咽癌風(fēng)險篩查的體外診斷新方法的建立具有重要的意義。