[發明專利]一種洛美沙星免疫原及其制備方法和檢測試紙卡

有效

• 申請號: 201611231309.7
• 申請日: 2016-12-28
• 公開（公告）號: CN106596959B
• 公開（公告）日: 2019-01-29
• 發明（設計）人: 姜金慶;劉長忠;趙坤;楊雪峰;王自良;范國英;胡建和;雷壯;牛琳琳;王靖文
• 申請（專利權）人: 河南科技學院
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 王加貴

1.一種檢測洛美沙星用試紙卡，包括卡殼、底板、樣品墊、金標墊、檢測和吸水區，所述檢測區設有檢測線T和質控線C，其特征在于，所述檢測線T位置包被有洛美沙星包被原，所述質控線C位置包被有兔抗IgG，所述金標墊附著有金標記的洛美沙星單克隆抗體；

所述金標記的洛美沙星單克隆抗體是由洛美沙星-牛血清白蛋白免疫原免疫小鼠得到的細胞株分泌產生；

所述洛美沙星-牛血清白蛋白免疫原，具有式I所示結構：

所述洛美沙星-牛血清白蛋白免疫原的制備方法，包括以下步驟：

1)將氨基戊酸和洛美沙星在緩沖溶液體系中進行脫水縮合反應，將得到的反應液依次進行萃取和反萃取，得到碳鏈延伸的LOM半抗原；

2)將所述步驟1)得到的碳鏈延伸的LOM半抗原溶于N，N-二甲基甲酰胺，得到碳鏈延伸的LOM半抗原溶液；將N-羥基琥珀酰亞胺和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽與所述碳鏈延伸的LOM半抗原溶液混合，避光反應，得到活化的LOM半抗原；

3)將牛血清白蛋白、葡萄糖和磷酸緩沖液混合，調節混合液的pH值至9.0～10，在振蕩條件下反應，得到活化的cBSA；

4)將所述步驟3)中得到的活化的cBSA溶解于含有N，N-二甲基甲酰胺的磷酸鹽緩沖溶液中，得到cBSA溶液；

5)將所述步驟2)得到的活化的LOM半抗原滴加到所述步驟4)得到的cBSA溶液中，在振蕩條件下反應，得到具有式I所示結構的洛美沙星-牛血清白蛋白免疫原：

所述步驟1)～2)與步驟3)之間沒有時間順序的限制；

所述洛美沙星包被原為洛美沙星-雞卵清白蛋白偶聯物；

所述洛美沙星包被原的制備方法包括以下步驟：

將洛美沙星與甲醇、DMF和PBS溶液混合，得到LOM混合液；

將雞卵清白蛋白與PBS緩沖液混合，得到OVA溶液；

將所述LOM混合液、OVA溶液和戊二醛溶液混合，在避光條件下置換反應，得到LOM包被原。

2.根據權利要求1所述的試紙卡，其特征在于，所述步驟1)中氨基戊酸溶液的pH值為10.0～12.0；所述氨基戊酸溶液的質量濃度為20～40mg/ml。

3.根據權利要求1所述的制試紙卡，其特征在于，所述步驟1)中洛美沙星溶液的質量濃度為18～36mg/ml；

所述洛美沙星溶液中的溶劑為摩爾濃度為0.01～0.02mol/L、pH值為7.4的PBS溶液。

4.根據權利要求1所述的試紙卡，其特征在于，所述步驟1)中萃取用萃取劑為乙酸乙酯；所述洗滌的洗滌液為質量濃度為0.09～0.18mg/ml的鹽酸溶液；所述反萃取用反萃劑為質量濃度為2.1～4.2mg/ml的碳酸氫鈉溶液。

5.根據權利要求1所述的試紙卡，其特征在于，所述步驟3)中振蕩的轉速為50～200r/min，所述步驟3)中反應的溫度為30～37℃。

6.根據權利要求1所述的試紙卡，其特征在于，所述步驟5)中振蕩的轉速為50～200r/min；所述振蕩的溫度為30～37℃。

7.根據權利要求1所述的試紙卡，其特征在于，所述洛美沙星包被原的包被濃度為0.1～0.2μg/ml。

8.根據權利要求1所述的試紙卡，其特征在于，所述洛美沙星單克隆抗體的質量濃度為0.1～0.2mg/ml。