[發(fā)明專利]基于培氟沙星類多克隆抗體檢測(cè)氟喹諾酮類藥物的試紙卡

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611231306.3
• 申請(qǐng)日: 2016-12-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106841600B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-09-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姜金慶;王亞楠;牛巧平;王金安;雷壯壯;牛琳琳;王靖文;周葉;吳世秀;劉長(zhǎng)忠
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南科技學(xué)院
• 主分類號(hào): G01N33/558
• 分類號(hào): G01N33/558;G01N33/531;G01N33/543
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 王加貴

本發(fā)明涉及基于培氟沙星類多克隆抗體檢測(cè)氟喹諾酮類藥物的試紙卡，屬于免疫化學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供了基于培氟沙星類多克隆抗體的檢測(cè)氟喹諾酮類藥物的試紙卡，包括塑料盒體，所述塑料盒體一端設(shè)置有加樣孔，設(shè)置在所述塑料盒體中的試紙條，所述試紙條包括支撐層，設(shè)置在所述支撐層上的樣品墊、金標(biāo)抗體結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，所述硝酸纖維素膜上設(shè)置有檢測(cè)線和質(zhì)控線，所述檢測(cè)線處設(shè)置有氟喹諾酮類藥物包被抗原，所述質(zhì)控線處設(shè)置有羊抗兔IgG，所述結(jié)合墊上灌注有膠體金標(biāo)記的抗培氟沙星類多克隆抗體。本發(fā)明提供的基于培氟沙星類多克隆抗體檢測(cè)氟喹諾酮類藥物的試紙卡操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，特異性強(qiáng)，檢測(cè)范圍廣，易于大范圍推廣應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫化學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及基于培氟沙星類多克隆抗體檢測(cè)氟喹諾酮類藥物的試紙卡。

背景技術(shù)

氟喹諾酮類藥物(fluoroquinolones，F(xiàn)Qs)是20世紀(jì)80年代之后研制并得到廣泛應(yīng)用的一類人工合成抗生素，具有良好的組織滲透性。氟喹諾酮類藥物的作用機(jī)理是抑制細(xì)菌的DNA旋轉(zhuǎn)酶，使酶不能在DNA雙鏈上引入切口，破壞細(xì)菌的代謝和繁殖，達(dá)到迅速殺滅細(xì)菌的目的，其對(duì)革蘭氏陽(yáng)性和陰性桿菌、葡萄球菌和肺炎球菌均有很強(qiáng)的抗菌活性。最初這類藥物用于治療尿道感染，后來(lái)發(fā)展到治療系統(tǒng)感染性疾病，主要用于泌尿系統(tǒng)感染、皮膚感染、呼吸道感染、消化道炎癥、傷寒和敗血癥等疾病的治療。由于它們具有吸收好、半衰期長(zhǎng)、抗菌譜廣、抗菌活性強(qiáng)、低毒高效、安全價(jià)廉，多數(shù)品種可以口服等許多優(yōu)點(diǎn)，因此在臨床中得到了廣泛應(yīng)用，并且在動(dòng)物飼養(yǎng)中作為預(yù)防和治療藥物普遍使用，有時(shí)還作為飼料添加劑促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，提高生長(zhǎng)速度與產(chǎn)量。

氟喹諾酮類藥物在獸醫(yī)臨床上長(zhǎng)期和大量使用，必然會(huì)導(dǎo)致其在動(dòng)物性食品中的殘留，從而給食品衛(wèi)生及人類健康帶來(lái)潛在的危害。研究表明：長(zhǎng)期使用氟喹諾酮類抗生素易導(dǎo)致動(dòng)物群體體內(nèi)致病菌產(chǎn)生耐藥性，并且這種耐藥性可能由動(dòng)物微生物向人類病原菌傳播；而且該類藥物在動(dòng)物體內(nèi)代謝緩慢，人體攝入后，會(huì)對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)及關(guān)節(jié)部位造成不良反應(yīng)，嚴(yán)重時(shí)，可引起食用者產(chǎn)生遠(yuǎn)期毒性及潛在的致癌、致畸、致突變效應(yīng)。因此，氟喹諾酮類藥物殘留問(wèn)題越來(lái)越引起人們的廣泛關(guān)注。我國(guó)以及世界衛(wèi)生組織、歐盟、美國(guó)、日本等國(guó)家和組織都將氟喹諾酮類藥物列入限制使用的獸藥藥物清單中，并制訂出相應(yīng)的最高殘留限量(maximum residue limit，MRL)和休藥期，而且加大了其殘留監(jiān)管力度。歐盟規(guī)定：動(dòng)物肌肉、肝臟和腎臟中二氟沙星、恩諾沙星(恩諾沙星+環(huán)丙沙星)、沙拉沙星等氟喹諾酮類獸藥最高殘留量為0.01-1.9mg/kg；美國(guó)和加拿大規(guī)定：氟喹諾酮為養(yǎng)蜂業(yè)禁用藥物，蜂王漿中各種氟喹諾酮類藥物MRL為5μg/kg；日本2006年5月29日開(kāi)始實(shí)施“肯定列表制度”后，除有暫定標(biāo)準(zhǔn)的藥物如恩諾沙星、噁喹酸等外，其余FQs均按10μg/kg的“一律標(biāo)準(zhǔn)”；我國(guó)規(guī)定FQs在牛奶中的MRL分別為：恩諾沙星(恩諾沙星+環(huán)丙沙星)為100μg/L，達(dá)氟沙星為30μg/L，氟甲喹為50μg/L。2015年9月9號(hào)，中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告(第2292號(hào))，自2016年12月31日起，停止經(jīng)營(yíng)、使用用于食品動(dòng)物的洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星4種原料藥的各種鹽、酯及其各種制劑。

國(guó)內(nèi)外用于FQs藥物殘留檢測(cè)的方法較多，主要包括高效液相法(HPLC)以及與此相關(guān)的HPLC-UV、HPLC-FD、HPLC-DVD、LC-MS/MS，LC-ESI-MS/MS，另外還有熒光光譜法、高效毛細(xì)管電泳法、薄層色譜法、ELISA、膠體金試紙、微生物學(xué)方法和電解分析法等。膠體金標(biāo)記免疫分析法是近年來(lái)迅速發(fā)展的一種新型分析技術(shù)，其特點(diǎn)是簡(jiǎn)便快速、成本低、無(wú)污染、無(wú)需培訓(xùn)，非常適合于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，與ELISA相比，具有樣品前處理簡(jiǎn)單，顯色時(shí)間短(3-5min)，且所有試劑包含在一根試紙條上，無(wú)需儀器等優(yōu)點(diǎn)，具有廣闊的市場(chǎng)前景和應(yīng)用價(jià)值。但目前，市場(chǎng)上銷售的試紙卡同時(shí)檢測(cè)的FQs獸藥殘留種類少，檢測(cè)效率受到影響。因此，研制檢測(cè)種類多的試紙卡對(duì)于保障動(dòng)物性食品安全具有十分重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容