[發(fā)明專利]一種生長代謝性能增強的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素突變菌株有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201611230966.X | 申請日： | 2016-12-26 |
| 公開（公告）號： | CN106635906B | 公開（公告）日： | 2021-03-09 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 葉貴子;黃青山 | 申請（專利權(quán)）人： | 昆山博青生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12P21/02;C12R1/46 |
| 代理公司： | 上海光華專利事務(wù)所(普通合伙) 31219 | 代理人： | 許亦琳 |
| 地址： | 215316 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 生長 代謝 性能 增強 高產(chǎn) 乳酸 鏈球 菌素 突變 菌株 | ||
本發(fā)明公開了一種生長代謝性能增強的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素突變菌株，該突變菌株與野生菌相比，能夠在更低的pH環(huán)境下生長并分泌產(chǎn)物乳酸鏈球菌素，且可以產(chǎn)生比野生菌更高的乳酸鏈球菌素，更加適合工業(yè)化生產(chǎn)。該突變菌株在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏日期：2016年12月05日，登記號：CGMCC No.13420，分類命名：乳酸乳球菌乳酸亞種，Lactococcus lactis subsp.Lactis。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于微生物誘變篩選技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種生長代謝性能增強的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素突變菌株。
背景技術(shù)
乳酸鏈球菌素(Nisin)，是由某些乳酸乳球菌(Lactococus Lactis)在代謝過程中合成、分泌的具有很強殺菌作用的小肽。Nisin能夠抑制大部分革蘭氏陽性菌及其芽孢的生長和繁殖，如葡萄球菌屬、鏈球菌屬、乳酸球菌屬、梭裝芽孢桿菌屬和芽孢桿菌屬的細菌，特別對金黃色葡萄球菌、溶血鏈球菌、肉毒桿菌抑制作用明顯。因此，Nisin可顯著的延長食品的保存時間或縮短殺菌所需的時間，在乳制品、肉制品、罐頭食品及植物蛋白食品等的保藏于防腐方面都有很好的作用。
自然界中分離得到的nisin生產(chǎn)菌株生物合成nisin的量一般較低，達不到工業(yè)化生產(chǎn)的要求，必須通過菌株改良，提高nisin的產(chǎn)量和細菌生長代謝性能。乳酸鏈球菌素發(fā)酵代謝過程中產(chǎn)物和副產(chǎn)物對細胞生長和代謝均會產(chǎn)生抑制。另一方面由于副產(chǎn)物乳酸的產(chǎn)生，pH是不斷下降的，pH下降對細胞生長和代謝造成很大不利影響。當(dāng)環(huán)境pH低于6.0產(chǎn)乳酸鏈球菌素細胞生長速率即開始減慢，pH低于4.5細胞停止生長。當(dāng)初始培養(yǎng)pH低于5.5細胞不生長。而同時由于生產(chǎn)菌種細胞對乳酸鏈球菌素具有吸附作用，乳酸鏈球菌素的提取工藝一般需要將pH調(diào)至2.0-3.0低pH附近來進行解吸附。低pH有益于乳酸鏈球菌素的活性保持，但是靠近中性水平的pH有益于產(chǎn)乳酸鏈球菌素的菌種生長。這就出現(xiàn)菌種最適生長pH和產(chǎn)物活性最適pH相互矛盾的問題。而如果我們對菌種進行選育改造，選育在更低的最適生長pH或者生長能夠耐受更低pH的突變菌株，獲得生長pH與活性保持pH更加接近的突變菌株，或者在低pH環(huán)境生長和代謝性能增強的突變菌株，無疑其更加有利于乳酸鏈球菌素的發(fā)酵生產(chǎn)和提取。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明，根據(jù)上述思路，對乳酸鏈球菌素產(chǎn)生菌進行了育變選育，并提供了一種在低pH環(huán)境生長代謝性能增強的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素突變菌株，來解決現(xiàn)有乳酸鏈球菌素發(fā)酵生產(chǎn)技術(shù)問題。
一種生長代謝性能增強的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素突變菌株，其特征在于，該突變菌株與野生菌相比，能夠在更低的pH環(huán)境下生長并分泌產(chǎn)物乳酸鏈球菌素，更加適合工業(yè)化生產(chǎn)。
所述突變菌株，其特征還有可以產(chǎn)生比野生菌更高的乳酸鏈球菌素。
本發(fā)明的生長代謝性能增強的高產(chǎn)乳酸鏈球菌素突變菌株：在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏日期：2016年12月05日，登記號：CGMCC No.13420，分類命名：乳酸乳球菌乳酸亞種，Lactococcus lactis subsp.Lactis，保藏地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號。
所述突變菌株是誘變后經(jīng)雙重篩選指標：Nisin抗性指標和受低pH指標篩選獲得。
為了實現(xiàn)本發(fā)明技術(shù)方案，采取如下步驟：
(1)菌種誘變；(2)初篩：(3)復(fù)篩；(4)精篩(5)搖瓶驗證實驗。
所述步驟(1)菌種誘變：
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