[發明專利]突變的泛素化特異性蛋白酶33基因及其應用

有效

• 申請號: 201611230738.2
• 申請日: 2016-12-28
• 公開（公告）號: CN106834317B
• 公開（公告）日: 2019-05-17
• 發明（設計）人: 王海軍;宋娜;趙鐵鎖;馮志偉;鐘加滕;陳秋月;齊金博;鄒亞文
• 申請（專利權）人: 新鄉醫學院
• 主分類號: C12N15/57
• 分類號: C12N15/57;C12N15/85;A61K38/48;A61P35/00
• 代理公司: 長春市東師專利事務所 22202
• 代理人: 張鐵生

本發明公開了一種突變的泛素化特異性蛋白酶33基因及其在生產治療結直腸癌藥物中的應用，經研究發現，KDM5B在結腸癌臨床樣本和結腸癌細胞系中高表達，通過抑制USP33進而促進結腸癌細胞的增殖。KDM5B抑制劑或其單克隆抗體，能夠顯著抑制結腸癌細胞的增殖。進一步研究證明，KDM5B與USP33基因啟動子區結合，抑制USP33基因的表達是通過結合其上游特異性調控序列GCACA/C或G/TGTGC來實現的。定點突變PCR技術獲得的突變的泛素化特異性蛋白酶33基因，可以抵抗KDM5B的抑制作用。從而抑制結腸癌細胞系的生長。

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，具體涉及一種突變的泛素化特異性蛋白酶33基因及其在生產治療結直腸癌藥物中的應用。

背景技術

結直腸癌（colorectal cancer）現已成為全球三大常見腫瘤之一。按照世界衛生組織（WHO）公布的數據顯示，結直腸癌在男性中為第三大易發腫瘤，僅次于肺癌、胃癌；在女性中為第二大易發腫瘤，僅次于乳腺癌，目前全球每年新增結直腸癌病例超過100萬。在我國，結直腸癌的死亡率僅次于肺癌、胃癌、肝癌、食管癌，位居第5位，嚴重危害居民健康，給社會和家庭經濟造成沉重負擔。其中由癌細胞轉移導致的死亡是結直腸癌致死的主要原因之一。結直腸癌的轉移發生涉及到細胞內一系列復雜的生物化學反應，在深入研究結直腸癌發生和發展的分子機制基礎上，進一步探索促進結直腸癌細胞增殖和侵襲遷移的分子機制及分子靶標，揭示其作用機制是腫瘤領域的研究熱點，具有重要的科學意義和臨床價值，更具有潛在的經濟效應和社會效應。

賴氨酸去甲基化酶5B（lysine-specific demethylase 5B，KDM5B），又叫JARID1B，是一重要的組蛋白去甲基化酶，屬于JARID1家族蛋白之一。JARID1家族共有4種蛋白，分別為：KDM5A，KDM5B，KDM5C，KDM5D。JARID1家族蛋白的特點是含有進化保守的5個蛋白結構域，其對基因的轉錄與調控起重要作用。

USP33（ubiquitin specific protease 33），即泛素化特異性蛋白酶33，是一種去泛素化酶。USP33通過Slit2-Robo信號通路參與神經細胞的生長發育、腫瘤細胞的侵襲與遷移。正常細胞內，USP33可以將泛素化的Robo受體去泛素化，從而穩定Robo，并通過Slit2-Robo信號通路影響胞漿中Actin cytoskeleton結構，而抑制細胞的遷移；但在腫瘤細胞內，由于USP33的表達量低下，導致泛素化的Robo受體不能及時去泛素化而被降解，Slit2-Robo信號通路不能正常發揮作用而引起腫瘤細胞的侵襲和遷移。

發明內容

本發明提供了一種突變的泛素化特異性蛋白酶33基因及其在生產治療結直腸癌藥物中的應用。

突變的泛素化特異性蛋白酶33基因，它的堿基序列如序列表SEQ ID NO.2所示。

一種表達載體，它是表達載體中插入了如序列表SEQ ID NO.2所示的基因。

所述的表達載體為pGL4.15。

突變的泛素化特異性蛋白酶33基因在生產治療結直腸癌藥物中的應用。

本發明提供了一種突變的泛素化特異性蛋白酶33基因及其在生產治療結直腸癌藥物中的應用，經研究發現，KDM5B在結腸癌臨床樣本和結腸癌細胞系中高表達，通過抑制USP33進而促進結腸癌細胞的增殖。KDM5B抑制劑或其單克隆抗體，能夠顯著抑制結腸癌細胞的增殖。進一步研究證明，KDM5B與USP33基因啟動子區結合，抑制USP33基因的表達是通過結合其上游特異性調控序列GCACA/C或G/TGTGC來實現的。定點突變PCR技術獲得的突變的泛素化特異性蛋白酶33基因，可以抵抗KDM5B的抑制作用。從而抑制結腸癌細胞系的生長。

附圖說明

圖1結直腸癌臨床組織樣本KDM5B和USP33的免疫組化檢測結果；