[發(fā)明專利]一種纖維蛋白原含量檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611227977.2
• 申請日: 2016-12-27
• 公開（公告）號: CN106645751B
• 公開（公告）日: 2018-08-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁重輝;閆君
• 申請（專利權(quán)）人: 北京賽科希德科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種纖維蛋白原含量檢測試劑盒。該試劑盒包括凝血酶試劑、咪唑緩沖液和定值血漿；凝血酶試劑包括凝血酶、咪唑、氯化鈣、甘露醇、蛋白胨、牛血清白蛋白和疊氮鈉。本發(fā)明確定了合適的凝血酶試劑、咪唑緩沖液的配制方案，研制出可用于醫(yī)院臨床檢測人血漿FIB含量的體外診斷試劑盒。該凝血酶試劑特含有Ca²⁺，以還原或補(bǔ)充臨床血樣中被抑制的鈣離子，更為理想地模擬了體內(nèi)正常凝血過程，為臨床檢測提供更為精確的數(shù)據(jù)參考。本發(fā)明試劑盒基本性能達(dá)到行業(yè)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)要求，其準(zhǔn)確度高，檢測范圍寬，穩(wěn)定性好，可向市場進(jìn)一步推廣使用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種用Clauss法測定纖維蛋白原含量檢測試劑盒。

背景技術(shù)

纖維蛋白原是一種由肝臟合成的具有凝血功能的糖蛋白，是纖維蛋白的前體。纖維蛋白原水平增高多見于糖尿病、炎癥應(yīng)激反應(yīng)，肥胖癥；纖維蛋白原水平降低多見于DIC、纖維蛋白溶解。肝功能嚴(yán)重障礙或先天性缺乏，均可使血漿纖維蛋白原濃度下降，嚴(yán)重時(shí)可有出血傾向。此外，纖維蛋白原也被用于心血管意外的致病性研究。

纖維蛋白原在肝臟(1.7～5g/天)和巨核細(xì)胞內(nèi)合成，血漿中參考值2～4g/l。纖維蛋白原由2Aα、2Bβ、2γ這6條鏈組成，在凝血酶(因子IIa)作用下，可將纖維蛋白原分子裂解成兩個(gè)纖維蛋白肽A片段FPA(從Aα鏈)和兩個(gè)纖維蛋白肽B片段FPB(從Bβ鏈)，α鏈與β鏈分別釋放出A肽與B肽，生成纖維蛋白單體。在此過程中，由于釋放了酸性多肽，負(fù)電性降低，單體易于聚合成纖維蛋白多聚體。但此時(shí)單體之間借氫鍵與疏水鍵相連，尚可溶于稀酸和尿素溶液中。內(nèi)源凝血途徑中的FXa與因子V(FV)、PF3和鈣離子構(gòu)成凝血酶原復(fù)合物，激活凝血酶原生產(chǎn)凝血酶。進(jìn)一步在Ca²⁺與活化的XIII因子(XIIIa)作用下，單體之間以共價(jià)鍵相連，則變成穩(wěn)定的不溶性纖維蛋白凝塊，完成凝血過程。

在正常的凝血機(jī)制中，必須有鈣離子的參與，而標(biāo)本采集過程中，為了防止血液凝集加入抗凝劑，抗凝劑中的枸櫞酸根離子抑制了全血鈣離子，因此必須在檢測試劑中加入鈣離子，以還原或補(bǔ)充被抑制的鈣離子，進(jìn)一步模擬體內(nèi)正常凝血過程。目前市場上鮮有廠家提到了“含鈣”的試劑體系，大部分產(chǎn)品均忽略或未提及試劑中Ca²⁺對血漿中FIB定量檢測的重要意義。本發(fā)明中的FIB定量試劑盒特將Ca²⁺加入凝血酶試劑體系中，將在體外更為精確的檢測人血漿中纖維蛋白原的含量，為臨床提供有利的數(shù)據(jù)參考。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種纖維蛋白原含量檢測試劑盒。該纖維蛋白原含量檢測試劑盒穩(wěn)定性佳、重復(fù)性好，同時(shí)操作安全簡便、準(zhǔn)確度高、線性范圍寬及兼容性強(qiáng)。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種纖維蛋白原含量檢測試劑盒，包括凝血酶試劑、咪唑緩沖液和定值血漿；

凝血酶試劑包括凝血酶、咪唑、氯化鈣、甘露醇、蛋白胨、牛血清白蛋白、疊氮鈉和水。

纖維蛋白原含量的測定原理：在過量凝血酶的存在下，被稀釋血漿的凝固時(shí)間可直接反映血漿中纖維蛋白原水平。向血漿中加入過量的凝血酶，使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白，從而出現(xiàn)凝固。凝固時(shí)間與纖維蛋白原含量呈負(fù)相關(guān)，通過建立標(biāo)準(zhǔn)曲線而獲得受檢血漿FIB含量的方法，即Clauss法。據(jù)調(diào)研得知，若將FIB含量和凝血時(shí)間分別取對數(shù)來繪制定標(biāo)相關(guān)曲線時(shí)，曲線的最為理想的斜率值為-1，當(dāng)曲線斜率值控制在-1～0時(shí)，表現(xiàn)為線性范圍小，F(xiàn)IB含量準(zhǔn)確性高，當(dāng)曲線斜率值小于-1時(shí)，表現(xiàn)為線性范圍大，F(xiàn)IB含量準(zhǔn)確性低。目前未見業(yè)內(nèi)廠家提及該試劑體系中FIB含量對數(shù)與凝血時(shí)間對數(shù)相關(guān)曲線斜率值對FIB定量準(zhǔn)確性的影響，且同類產(chǎn)品的該相關(guān)曲線斜率值大都小于-1。本發(fā)明通過研發(fā)條件優(yōu)化，特將該相關(guān)曲線斜率值控制在-(1±0.05)，既保證了FIB的檢測范圍又保證了FIB定量的準(zhǔn)確性。