[發明專利]用于獲得Nrf1D蛋白抗體的免疫原、Nrf1D蛋白抗體及Elisa檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201611226293.0
• 申請日: 2016-12-27
• 公開（公告）號: CN106699899B
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發明（設計）人: 張義國;汪紅霞
• 申請（專利權）人: 重慶大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K16/18;G01N33/68
• 代理公司: 重慶博凱知識產權代理有限公司 50212
• 代理人: 孔玲瓏

本發明提供用于獲得Nrf1D蛋白抗體的免疫原、Nrf1D蛋白抗體及Elisa檢測試劑盒，所述免疫原為先合成氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽，以Sulfo?SMCC為偶聯劑，將所述多肽與玥孔戚血藍蛋白偶聯得到；所述抗體以所述免疫原為抗原，將所述抗原用弗氏完全佐劑乳化后免疫新西蘭白兔，取免疫后的新西蘭白兔血進行離心，收集離心后的上清液獲得；所述Elisa檢測試劑盒組分包括酶標板、包被液、封閉液、酶標二抗、TMB顯色液、終止液、檢測抗原和所述Nrf1D蛋白抗體，所述檢測抗原為合成氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽，以戊二醛為偶聯劑，將所述多肽與牛血清白蛋白偶聯獲得。

技術領域

本發明屬于抗體技術領域，具體涉及用于獲得Nrf1D蛋白抗體的免疫原、Nrf1D蛋白抗體及Elisa檢測試劑盒。

背景技術

CNC-bZIP是bZIP轉錄因子的一個亞家族，該亞家族以一個大約40個氨基酸同源域為其特征，該區域與N末端的堿性亮氨酸拉鏈區域緊鄰。從進化角度來看，具有這個同源域的蛋白在秀麗隱桿線蟲(Skn1)、黑腹果蠅(cap‘n’collar)、雞(ECH)[63]、小鼠(Bach)和人的發育過程中，都有廣泛的參與。在人體內，目前已知的三個成員(NF-E2、TCF11/LCR-F1/Nrf1和Nrf2)以及它們在鼠科動物體內的同源蛋白都已在證明導致β球蛋白基因位點的譜系特異性表達機制的過程中被分離并鑒定。然而，只有NF-E2才有細胞類型的特異性，Nrf1和Nrf2均沒有。相應敲除小鼠的數據和之前的研究(Nrf1結合位點在紅色的膽色素原脫氨酶基因、血紅素加氧酶1(HO1)基因和NAD(P)H:醌氧化還原酶的表達中起著重要的作用)均表明，這些因子廣泛的參與哺乳動物的基因調控。研究發現：啟動子元件和轉錄因子參與小鼠肥大細胞系CPII(用IgE+抗原(Ag)刺激)和小鼠胎兒樹突狀細胞系DC18(用IgG+Ag刺激)對TNFα的感應。在肥大細胞中，IgE+Ag響應元件被映射到一個與轉錄因子AP1和NF-ATP1和NF-AT(延伸的κ3/AP1+位點ATGAGCTCATGGGTTTCTCCACCACCAA；黑體部分是AP1和NF-AT位點)相互作用的28bp寡核苷酸上。在小鼠樹突狀細胞系DC18中，做相應的分析，發現了一個類似的位點(GAGCTCATGGGTTTCTCCACCAA，延伸的κ3/AP1-位點)，這個位點的5′2nt(AT)更短，因此該位點刪除了AP1結合位點。在該細胞系中，可以觀察到結合這個探針的Nrf1，而在肥大細胞中，使用凝膠轉移分析法觀察不到任何轉錄因子與該探針的相互作用。這種差異在功能上受到報告基因載體的5’啟動子缺失的支持，該啟動子被證明是完整AP1位點的誘導所必需的，但這僅限于肥大細胞而對樹突狀細胞無效。研究發現，收到IgE+Ag刺激后，在肥大細胞TNFα啟動子的AP1復合體中，發現了與幾種經典的AP1轉錄因子(c-jun、junD、fosB和ATF2)結合在一起的Nrf1或與其緊密相關的因子。使用PCR檢測/克隆技術，在該細胞系中，已鑒定出Nrf1的六種剪接突變體。其中有幾種刪除了之前假定的起始和終止密碼子；有些剪接突變體，例如Nrf1D，包含一個在bZIP區域發生改變的C末端，這導致了終止子的缺失。這個被改變的亮氨酸拉鏈區的表達干擾了TNFα對轉錄過程的誘導作用，這表明，該剪接變體確實能與活化的AP1/NF-AT復合物相互作用。但是目前面臨最大的問題是尚未有合適的試劑能檢測Nrf1D蛋白的表達情況。

發明內容

針對現有技術存在的上述不足，本發明要解決的技術問題是：針對現有技術中沒有能夠檢測Nrf1D蛋白表達情況的抗體和相關檢測試劑盒，而提供用于獲得Nrf1D蛋白抗體的免疫原、Nrf1D蛋白抗體及Elisa檢測試劑盒。

為了解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案：用于獲得Nrf1D蛋白抗體的免疫原，合成氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽，以Sulfo-SMCC為偶聯劑，將所述多肽與玥孔戚血藍蛋白偶聯，得到所述用于獲得Nrf1D蛋白抗體的免疫原。