[發明專利]一種高酯化活力的脂肪酶突變體

有效

• 申請號: 201611225678.5
• 申請日: 2016-12-27
• 公開（公告）號: CN108239626B
• 公開（公告）日: 2022-10-04
• 發明（設計）人: 宣姚吉;周美鳳;戴小軍;徐正軍;牛其文
• 申請（專利權）人: 豐益（上海）生物技術研發中心有限公司
• 主分類號: C12N9/20
• 分類號: C12N9/20;C12N15/55;C12N15/63;C12P7/649
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 韋東

1.一種多肽，所述多肽選自：

（1）氨基酸序列如SEQ ID NO：4或6所示的多肽；和

（2）由SEQ ID NO：4或6所示的序列與促進其表達與純化的序列組成的多肽。

2. 如權利要求1所述的多肽，其特征在于， 所述促進序列表達與純化的序列選自信號肽、末端延伸、GST、麥芽糖E結合蛋白、蛋白A、標簽、Xa因子的蛋白水解酶位點、凝血酶的蛋白水解酶位點和腸激酶的蛋白水解酶位點中的一條或多條序列。

3.如權利要求2所述的多肽，其特征在于，所述標簽為6His或Flag。

4. 一種多核苷酸分子，其特征在于，所述多核苷酸分子的多核苷酸序列選自：

（1）編碼權利要求1-3中任一項所述多肽的多核苷酸序列；和

（2）與（1）所述的多核苷酸序列互補的多核苷酸序列。

5. 如權利要求4所述的多核苷酸分子，其特征在于，所述多核苷酸序列如SEQ ID NO：3或5所示。

6.一種多核苷酸構建物，其特征在于，所述多核苷酸構建物含有權利要求4或5所述的多核苷酸分子。

7.如權利要求6所述的多核苷酸構建物，其特征在于，所述多核苷酸構建物是表達載體或克隆載體。

8. 一種遺傳工程化的宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞：

（1）表達權利要求1-3中任一項所述的多肽；和/或

（2）含有權利要求4或5所述的多核苷酸分子或權利要求6或7所述的多核苷酸構建物。

9.一種生物柴油的制備方法，其特征在于，所述方法包括使用權利要求1-3中任一項所述的多肽或權利要求8所述的遺傳工程化的宿主細胞合成生物柴油的步驟。

10.如權利要求9所述的方法，其特征在于，所述方法包括以動植物油脂和有機醇為原料，在水和所述多肽的存在下進行酯交換反應的步驟，其中所述動植物油脂選自：餐飲廢油、粗油酸、酸化油、或棕櫚脂肪酸餾出物與脂肪酸酯的混合物。

11.如權利要求10所述的方法，其特征在于，所述方法具有以下一項或多項特征：

所述棕櫚脂肪酸餾出物和脂肪酸酯的混合物中，以重量計，棕櫚脂肪酸餾出物的含量為70～80％，脂肪酸酯的含量為20～30％；

所述有機醇以分批或流加的方式添加；

所述多肽的用量為所述動植物油脂重量的0.005％以上；

水的添加量為所述動植物油脂重量的1%以上；

添加堿調節酯交換反應物的pH；和

酯交換反應的溫度在35±5℃的范圍內。

12.如權利要求11所述的方法，其特征在于，所述脂肪酸酯是脂肪酸甲酯或脂肪酸乙酯，所述有機醇是甲醇或乙醇。

13.如權利要求11所述的方法，其特征在于，所述有機醇的總用量為所述動植物油脂中所含游離脂肪酸質量的2倍以上。

14.如權利要求11所述的方法，其特征在于，所述多肽的用量為所述動植物油脂重量的0.01%以上。

15.如權利要求11所述的方法，其特征在于，所述多肽的用量為所述動植物油脂重量的0.02%以上。

16.如權利要求11所述的方法，其特征在于，所述多肽的用量為所述動植物油脂重量的0.03％以上。

17.如權利要求11所述的方法，其特征在于，所述多肽的用量為所述動植物油脂重量的0.05％以上。