[發(fā)明專利]一種絲氨酸蛋白酶抑制劑重組分子、其制備方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611225198.9
• 申請日: 2016-12-27
• 公開（公告）號: CN106749637B
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 韋丹;連杰
• 申請（專利權(quán)）人: 河南省華隆生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07K14/81
• 分類號: C07K14/81;C12N15/70;A61K38/55;A61K48/00;A61P7/02
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟;侯桂麗

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種重組分子，一種絲氨酸蛋白酶抑制劑重組分子、其制備方法及應(yīng)用，所述重組分子的氨基酸序列為SEQ ID NO.1?SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。本發(fā)明的重組分子包含RGD結(jié)構(gòu)域的重組TAP是以天然蛋白為基礎(chǔ)的抑制劑，能夠用來開發(fā)抗Xa因子和抗血小板聚集的藥物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種重組分子，一種絲氨酸蛋白酶抑制劑重組分子、其制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

Xa因子(fXa)是一種絲氨酸蛋白酶，在內(nèi)源性凝血途徑和外源性凝血途徑的交匯處發(fā)揮作用，激活凝血素變?yōu)槟浮Ｄ敢来渭せ钛“宀⒖扇艿难獫{纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為不溶的血栓纖維蛋白基質(zhì)。然而，在鈣離子存在的情況下Xa因子在凝血瀑布中的功能需要在復(fù)雜的輔助因子、Va因子和磷酸酯膜等的幫助下發(fā)揮。Xa因子在血液凝固中的核心作用表明Xa因子抑制劑可能具有抗凝劑的治療功效。

從軟蜱蟲(非洲鈍緣蜱)提取物中分離純化得到一種小分子絲氨酸蛋白酶抑制劑TAP，這個多肽是一種針對Xa因子的緩慢、緊密結(jié)合的抑制劑。此氨基酸序列(60個殘基)與Kunitz型抑制劑具有有限的同源性。然而，與此類其它抑制劑不同，TAP僅抑制Xa因子。TAP的專一性及分子大小表明它具有作為抗凝劑的治療價值。

“Mao SS,Huang J,Welebob C,et al.Identification and characterizationof variants of tick anticoagμlant peptide with increased inhibitory potencytoward human factor Xa.Biochemistry 1995,18,34(15):5098-5103.“中的Mao等將TAP的第一位酪氨酸殘基替換為色氨酸，把第十位天冬氨酸替換為精氨酸，產(chǎn)生rTAP(Y1W/D10R)的雙重突變體，結(jié)果rTAP(Y1W/D10R)雙重突變體的抗Xa的活性增加了37倍。“水蛭素衍生物基因的克隆及其在大腸桿菌中的表達。上海醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，1996，23(3)：181-184”中羅春貞等在合成水蛭素基因時將RGD編碼順序融合在水蛭基因中，構(gòu)建了水蛭素衍生物并在大腸桿菌中實現(xiàn)表達，表達產(chǎn)物證明有抗血液凝固活性。

可見，天然Xa因子抑制劑如蜱蟲和線蟲抗凝肽最初分別從非洲鈍緣蜱(TAP)和犬鉤蟲(AcAP，NAP)中分離而來，它們對血小板聚集的均有抑制作用，但并沒有雙重功能。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種絲氨酸蛋白酶抑制劑重組分子、其制備方法及應(yīng)用，所述絲氨酸蛋白酶抑制劑重組分子即可以抗Xa又可以抗血小板凝聚，具有雙功能活性，將具有廣泛的應(yīng)用前景。

為達到此發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

第一方面，本發(fā)明提供了一種絲氨酸蛋白酶抑制劑重組分子，其特征在于，所述重組分子的氨基酸序列為SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。

所述氨基酸序列如下：

SEQ ID NO.1：

YNRLCIKPRDWIDECDTPRGDMPGPGGCDSFWICPEDHTGADYYSSYRDCFNACI；

SEQ ID NO.2：

YNRLCIKPRDWIDECKRIPRGDMPGPYPGGCDSFWICPEDHTGADYYSSYRDCFNACI；

SEQ ID NO.3：

YNRLCIKPRDWIDECDATPRGDMPGPGGCDSFWICPEDHTGADYYSSYRDCFNACI；

SEQ ID NO.4：