[發明專利]一種用于核酸樣本采集的載體原件的制備方法

在審

• 申請號: 201611224977.7
• 申請日: 2016-12-27
• 公開（公告）號: CN106596227A
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發明（設計）人: 何駿奇;傅詠南;樂涵駿;張奕
• 申請（專利權）人: 上海中優醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬生物技術領域，具體涉及核酸樣本采集的載體原件制備方法。

背景技術

針對含有核酸樣本進行檢測廣泛應用于臨床和研究中。一般樣本都是含有核酸的細胞液體樣本，比如口腔黏膜、血液。從而樣本的采集在臨床和研究中也是極其重要的工作。

傳統的臨床含有核酸樣本的采集，多為采集血清或體液樣本，采集的樣本需要進行預處理后方可使用，處理時間較長。

傳統的研究方法則需要各種不同的含有核酸的樣本來進行研究，而含有核酸的液體樣本的運輸和保存需要冷藏的控制，在實際運行中具有一定的操作難度。

干式含有核酸液體樣本的采集方法可以滿足上訴應用的需求。而干式采集法中含有核酸液體的載體原件則是關鍵。

目前主要常用的載體有棉花。這種載體使用非常簡易，但容易出現如下問題：一是通過棉花獲取含有核酸的細胞量不宜控制；而且操作過程中棉花容易被污染，從而造成分析結果的不準確；三是通過棉花將采集的樣本轉移至采樣收集容器上，操作不方便而且還有轉移效率的問題。

此外，也有使用濾紙和無紡布。但是這些載體有這一個共同的缺陷就是雖然采樣過程的操作比較便捷，但是由于只是一種未經處理的吸水性采集載體，對于所采集的樣本的保護和預處理能力較差。

本發明的制備方法，采用對吸水性采集載體進行細胞固定液的預處理，使得采集載體在采集樣本后對樣本中含有的核酸的保護更好，從而在操作和運輸的便捷性上有了很大的提高，也提高了檢測的效率。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于核酸樣本采集的載體原件的制備方法，用于采集含有核酸的液體樣本的載體原件的處理，使含有核酸液體樣本在載體原件上更易于固定，同時也使含有核酸得到適度的裂解和解構。

本發明的制備方法采用如下技術方案。

（1）采集載體的原件，選擇吸水性平面載體，比如濾紙、無紡布。

（2）將吸水性平面載體置于細胞固定液中，浸泡5分鐘。

細胞固定液的成分為：20mM 曲拉通、10 mM 乙二胺四乙酸、25mM 三羥甲基氨基甲烷鹽酸三羥甲基氨基甲烷、5mM異硫氰酸胍。

（3）將浸泡后的吸水性平面載體至于烘箱中，37℃ 1小時。

（4）將烘干后的吸水性平面載體紫外滅菌，紫外照射 30分鐘。

（5）將滅菌后的吸水性平面載體，無菌安裝于采集卡中，備用。

本發明制備的采集載體原件的樣本采集步驟如下：

（1）將含有核酸的液體樣本至于采集卡加樣區的載體單元區內。

（2）將采樣卡至于一個水平表面上，靜置2分鐘用于晾干液體樣本。

（3）樣本晾干后，將覆蓋區的塑料薄膜的上層截取，進行封裝和后續的運輸。

本發明制備的采集載體原件采集樣本后的檢測前處理步驟如下：

（1）用取樣器將采集含有核酸液體樣本的載體原件直徑為1.5厘米大小取下載體原件。

（2）將載體原件放置于200ul的10mM三羥甲基氨基甲烷鹽酸三羥甲基氨基甲烷和1mM乙二胺四乙酸的溶液中，37℃ 10分鐘。

（3）將溫浴后的溶液用電泳法驗證核酸含量后進行后續基因分析。

與已有技術相比，本發明有益效果體現在

1、本發明為臨床和研究的含有核酸的液體樣本提供了一種載體原件，使用過程中無需配套采集設備。

2、本發明制備的采集卡采集含有核酸的液體樣本，無需離心等預處理，制備核酸原溶液時間僅需5分鐘。

附圖說明

圖1是電泳圖

1：血液基因組核酸電泳條帶，M：核酸電泳標記

具體實施方式

下面結合附圖和具體實施例對本發明作進一步說明，但不作為對本發明的限定。

實施例

采集血樣：

用滴管吸取20毫升的血液滴入細胞固定液處理后的濾紙上，使血液樣本均勻涂抹于濾紙上的加樣區內，在25℃的溫度下晾干10分鐘。

濾紙上的核酸析出：

用取樣器在濾紙的加樣區內采集直徑為1.5厘米大小的含有血液樣本的濾紙。

將濾紙放置于200ul的10mM三羥甲基氨基甲烷鹽酸三羥甲基氨基甲烷和1mM乙二胺四乙酸的溶液中，37℃ 10分鐘。

將溫浴后的核酸溶液用電泳法驗證，結果如圖1。

1 為溫浴后的含有血液基因組核酸溶液的電泳條帶。

M 為核酸電泳標記。