[發(fā)明專利]一種流式細(xì)胞術(shù)的細(xì)胞樣品制備新方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201611222208.3
• 申請日: 2016-12-19
• 公開（公告）號: CN108204914A
• 公開（公告）日: 2018-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃承揚(yáng);劉仕松
• 申請（專利權(quán)）人: 黃承揚(yáng);劉仕松
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種關(guān)于流式細(xì)胞檢測技術(shù)的細(xì)胞樣品制備新方法，改進(jìn)傳統(tǒng)細(xì)胞樣品制備流程，創(chuàng)新性地通過“充分固定?溫和透膜?保護(hù)性細(xì)胞洗滌”這一實(shí)驗(yàn)流程，獲得良好的細(xì)胞樣品完整性，最大限度保持流式細(xì)胞術(shù)檢測過程中完整細(xì)胞的得率，能夠顯著提高細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)分子的檢測效率，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性。該樣品制備方法適用于人體來源的各種細(xì)胞包括腫瘤細(xì)胞，特別是在人體組織中可檢測細(xì)胞的數(shù)量比較少的情況下，可以在不破壞細(xì)胞完整結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，有效地檢測細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核里的蛋白分子。這種新的細(xì)胞樣品制備方法可廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和臨床研究中對細(xì)胞內(nèi)蛋白分子的流式細(xì)胞檢測。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物樣品檢測領(lǐng)域，特別是涉及流式細(xì)胞檢測技術(shù)。

背景技術(shù)

流式細(xì)胞術(shù)是一種在液流系統(tǒng)中，快速測定單個細(xì)胞或細(xì)胞器的生物學(xué)性質(zhì)，并把特定的細(xì)胞或細(xì)胞光散射和光吸收來定量測定細(xì)胞DNA含量、細(xì)胞體積、蛋白質(zhì)含量、酶活性、細(xì)胞膜受體和表面抗原等許多重要參數(shù)的科學(xué)技術(shù)。研究者根據(jù)這些參數(shù)將不同性質(zhì)的細(xì)胞分開，以獲得供生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究用的純細(xì)胞群體。目前流式細(xì)胞術(shù)最高分選速度已達(dá)到每秒鐘3萬個細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)已普遍應(yīng)用于免疫學(xué)、血液學(xué)、腫瘤學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、生物化學(xué)等臨床醫(yī)學(xué)和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。然而通過對現(xiàn)有的流式細(xì)胞術(shù)的研究發(fā)現(xiàn)，該技術(shù)目前存在著細(xì)胞容易破碎、著色效果差不易分流等不足。特別是在檢測細(xì)胞內(nèi)蛋白含量的時候，傳統(tǒng)的細(xì)胞樣品制備方法容易破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致樣品中能夠被檢測到的細(xì)胞數(shù)量的減少，降低實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性和數(shù)據(jù)的完整性。這正是此次提出申請所要解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題是提供一種流式細(xì)胞術(shù)的細(xì)胞樣品制備新方法，能夠解決細(xì)胞容易破碎、著色效果差不易分流等問題。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的一個技術(shù)方案是：改進(jìn)傳統(tǒng)細(xì)胞樣品制備流程，通過“充分固定-溫和透膜-保護(hù)性細(xì)胞洗滌”這一常用流程獲得較好的細(xì)胞樣品完整性預(yù)處理。其中在溫和透膜過程中，利用我們配置的新型透膜試劑，可以在90秒內(nèi)快速完成細(xì)胞樣品的透膜處理并使細(xì)胞損失減到最低。該方案的特征在于通過更換實(shí)驗(yàn)試劑和調(diào)整實(shí)驗(yàn)處理時間來實(shí)現(xiàn)比較好的細(xì)胞處理效果，從而區(qū)分于此前的實(shí)驗(yàn)方法。

本發(fā)明的有益效果是：最大限度保持流式細(xì)胞術(shù)檢測過程中細(xì)胞樣品的完整性，顯著提高檢測的效率，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性。

附圖說明

圖1為傳統(tǒng)細(xì)胞樣品制備方法/陰性對照組(Negative ctrl)

總計(jì)數(shù)量1761，其中活細(xì)胞數(shù)(P1部分)86，占比4.88％.

圖2為傳統(tǒng)細(xì)胞樣品制備方法/SOX-2抗體組

總計(jì)數(shù)量1145，其中活細(xì)胞數(shù)(P1部分)52，占比4.54％.

圖3為新的細(xì)胞樣品制備方法/陰性對照組(Negative ctrl)

總計(jì)數(shù)量6004，其中活細(xì)胞數(shù)(P1部分)1476，占比24.58％.

圖4為新的細(xì)胞樣品制備方法/SOX-2抗體組

總計(jì)數(shù)量5888，其中活細(xì)胞數(shù)(P1部分)901，占比15.30％.

圖5為新的細(xì)胞樣品制備方法/陰性對照組(Negative ctrl)

總計(jì)數(shù)量19065，其中活細(xì)胞數(shù)(P1部分)5294，占比27.77％.

圖6為新的細(xì)胞樣品制備方法/SOX-2抗體組

總計(jì)數(shù)量20039，其中活細(xì)胞數(shù)(P1部分)5000，占比24.95％.