[發明專利]一種高靈敏度的OsHV?1實時熒光定量PCR檢測試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201611222164.4
• 申請日: 2016-12-26
• 公開（公告）號: CN106755574B
• 公開（公告）日: 2018-02-13
• 發明（設計）人: 劉貴明;疏義林;王緒敏
• 申請（專利權）人: 中國科學院北京基因組研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于檢測牡蠣皰疹病毒OsHV-1的試劑盒，其特征在于：

所述的試劑盒包括引物組和熒光探針；所述的引物組由引物OsHV- F1、引物OsHV-R1、引物OsHV-F2和引物OsHV-R2組成；

所述的引物OsHV-F1的序列為SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；

所述的引物OsHV-R1的序列為SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列；

所述的引物OsHV-F2的序列為SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列；

所述的引物OsHV-R2的序列為SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列；

所述的熒光探針為熒光探針OsHV-P，熒光探針OsHV-P為TaqMan探針，所述的熒光探針OsHV-P序列為SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列；所述的熒光探針OsHV-P的核苷酸序列的5’端連接熒光基團FAM，3’端連接猝滅基團BHQ1；

所述的試劑盒的使用方法為：從待測樣品中提取病毒DNA為模板，利用引物OsHV-F1、引物OsHV-R1、引物OsHV-F2、引物 OsHV-R2和熒光探針OsHV-P，通過以下PCR擴增程序進行實時熒光定量PCR：

94～96℃預變性2分鐘；94～95℃變性15～30秒、65～69℃退火30～75 秒、68～72℃延伸30～40秒，6～9個循環；93～95℃變性15～20秒、60℃退火30秒、68～72℃ 延伸30秒，8個循環；93～95℃變性15秒、52～55℃退火延伸30～60秒，40個循環；55℃時收 集熒光并判定結果。

2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述的試劑盒還包括病毒DNA提取試劑、 DNA聚合酶、陽性質控品和陰性質控品。

3.如權利要求2所述的試劑盒，其特征在于：所述的陽性質控品為：

以牡蠣皰疹病毒OsHV-1的基因組DNA為PCR模板，以權利要求1所述的引物OsHV-F1和 OsHV-R1為PCR引物擴增得到的DNA片段，或含有該DNA片段的核酸片段或質粒；

所述的陰性質控品為RNase free H₂O。