[發(fā)明專利]一種TIL細胞體外擴增培養(yǎng)基組合和培養(yǎng)方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201611220586.8 | 申請日： | 2016-12-26 |
| 公開（公告）號： | CN106754703B | 公開（公告）日： | 2018-03-16 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 郭天歡;楊小芳;何淑婷 | 申請（專利權(quán)）人： | 浙江丹暉生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/0783 | 分類號： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 北京英創(chuàng)嘉友知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙)11447 | 代理人： | 耿超,王浩然 |
| 地址： | 311100 浙江省杭州市*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 til 細胞 體外 擴增 培養(yǎng)基 組合 培養(yǎng) 方法 | ||
1.一種TIL細胞體外擴增培養(yǎng)方法，其特征在于，包括使用TIL細胞體外擴增培養(yǎng)基組合，所述方法包括：
誘導培養(yǎng)：將TIL細胞接種于誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)2-4天獲得誘導培養(yǎng)細胞；
增殖培養(yǎng)：將所述誘導培養(yǎng)細胞接種于增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)7-12天獲得增殖培養(yǎng)細胞；
活化適應：將所述增殖培養(yǎng)細胞接種于活化適應培養(yǎng)基中培養(yǎng)0.5-1.5天；
所述誘導培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)和活化適應在免疫細胞體外擴增裝置中進行，所述裝置包括細胞培養(yǎng)袋(1)和承載所述細胞培養(yǎng)袋(1)的承載臺(3)，該裝置還包括容納于所述細胞培養(yǎng)袋(1)中的磁性浮球(2)以及在懸掛于所述細胞培養(yǎng)袋(1)上方并且能夠驅(qū)動所述磁性浮球(2)在所述細胞培養(yǎng)袋(1)中移動的磁性懸掛驅(qū)動器(4)，所述磁性懸掛驅(qū)動器(4)包括能夠吸引所述磁性浮球(2)的磁體片(41)和能夠懸掛且驅(qū)動所述磁體片(41)在所述細胞培養(yǎng)袋(1)上方移動的懸掛驅(qū)動架(42)；所述細胞培養(yǎng)袋(1)中充有細胞培養(yǎng)液，述細胞培養(yǎng)液中含有培養(yǎng)基以及待擴增的細胞；所述磁性浮球(2)在浮力和磁力的合力作用下漂浮在培養(yǎng)液液面上；所述磁體片(41)能夠在所述細胞培養(yǎng)袋(1)上方往復移動，從而通過磁力的作用，驅(qū)動所述磁性浮球(2)在漂浮狀態(tài)下在培養(yǎng)液液面往復移動，所述磁性浮球(2)在培養(yǎng)液液面以下的部分能夠攪拌培養(yǎng)液；
所述TIL細胞體外擴增培養(yǎng)基組合包括誘導培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和活化適應培養(yǎng)基；
所述誘導培養(yǎng)基的組成成分包括：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、滅活動物血清、香菇多糖、黃芪多糖、黨參多糖和枸杞多糖；
所述增殖培養(yǎng)基的組成成分包括：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、滅活動物血清、白細胞介素和單克隆抗體；所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為AIM-V培養(yǎng)基和RPMI-1640培養(yǎng)基；所述白細胞介素為IL-7、IL-12和IL-15；所述單克隆抗體為CD3單克隆抗體、CD134單克隆抗體和PD-1單克隆抗體；
所述活化適應培養(yǎng)基包括：基礎(chǔ)培養(yǎng)基、胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白和谷氨酰胺。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其中，所述滅活動物血清為胎牛血清。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的培養(yǎng)方法，其中，所述誘導培養(yǎng)基包括以下含量的各組分：
香菇多糖20-50μg/mL、黃芪多糖20-50μg/mL、黨參多糖20-50μg/mL、枸杞多糖20-50μg/mL、體積百分含量為5-10％的胎牛血清；AIM-V培養(yǎng)基與RPMI-1640培養(yǎng)基的體積比為1：1-1.4。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的培養(yǎng)方法，其中，所述增殖培養(yǎng)基包括以下含量的各組分：
IL-7 5-15ng/mL、IL-12 5-15ng/mL、IL-15 5-15ng/mL、CD3單克隆抗體10-30ng/mL、CD134單克隆抗體10-30ng/mL、PD-1單克隆抗體10-30ng/mL、體積百分含量為5-10％的胎牛血清；AIM-V培養(yǎng)基與RPMI-1640培養(yǎng)基的體積比為1：1.2-1.6。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、2和4中任意一項所述的培養(yǎng)方法，其中，所述活化適應培養(yǎng)基包括以下含量的各組分：
胰島素1.5-3μg/mL、轉(zhuǎn)鐵蛋白2-3μg/mL、谷氨酰胺1-2mM；AIM-V培養(yǎng)基與RPMI-1640培養(yǎng)基的體積比為1：2-4。
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