[發明專利]與小麥寡分蘗基因Ltn3共分離的分子標記R207及其應用

有效

• 申請號: 201611219190.1
• 申請日: 2016-12-26
• 公開（公告）號: CN106636406B
• 公開（公告）日: 2020-08-21
• 發明（設計）人: 劉亞西;王智強;武方琨;陶陽;盧艷麗;馬建;覃鵬;魏育明;鄭有良
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.與小麥寡分蘗基因Ltn3共分離的分子標記R207，其特征在于，標記R207位于小麥2D染色體長臂上，核苷酸序列如下：5’-GGCATCTACATTCGCGTTCNTGCCTGCAGCGGTCAGTCTGATCACCAG-3’；其中，N為C或T；C對應于寡分蘗表型。

2.用于檢測權利要求1所述分子標記R207的試劑在鑒定寡分蘗小麥品種中的應用。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取待測小麥的基因組DNA；

2)以待測小麥的基因組DNA為模板，基于KASP檢測平臺技術設計引物，進行熒光定量PCR擴增；

3)采用熒光檢測儀分析PCR產物，進行基因分型；

步驟2)的引物序列如下：

R207-1:5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTGGCATCTACATTCGCGTTCC-3’；

R207-2:5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTGGCATCTACATTCGCGTTCT-3’；

R207-3:5’-CTGGTGATCAGACTGACCGC-3’；

并且，引物R207-1和R207-2的5’端分別連有不同的熒光基團FAM、HEX。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，步驟2)中熒光定量PCR擴增反應體系：2×KASP Mastermix 5μL，KASP Assay Mix 0.14μL，模板DNA 50ng、Dnase/RNase-free去離子水加至總量為10μL；其中，KASP Assay Mix中含有引物R207-1、R207-2和R207-3，體積比為2:2:5。

5.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，步驟2)中熒光定量PCR程序：95℃活化15min；95℃變性20s，65℃退火延伸60s，循環10次，每次退火延伸溫度降低1℃；94℃變性20s，57℃退火延伸60s，循環30次；37℃60s，采集熒光信號。

6.基于KASP技術檢測權利要求1所述分子標記R207的引物組合，其特征在于，所述引物組合包括：

R207-1:5’-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTGGCATCTACATTCGCGTTCC-3’；

R207-2:5’-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTGGCATCTACATTCGCGTTCT-3’；

R207-3:5’-CTGGTGATCAGACTGACCGC-3’；

并且，引物R207-1和R207-2的5’端分別連有不同的熒光基團FAM、HEX。

7.權利要求6所述的引物組合在寡分蘗小麥品種分子標記輔助育種中的應用。