[發(fā)明專(zhuān)利]雙膜片蛋白質(zhì)印跡雜交儀及其實(shí)驗(yàn)操作方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611218488.0
• 申請(qǐng)日: 2016-12-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108241063B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-04-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王宇;李郁;郁國(guó)宏
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 蘭州奧潤(rùn)環(huán)境工程有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/68
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/68
• 代理公司: 北京酷愛(ài)智慧知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11514
• 代理人: 孟凡臣

本發(fā)明涉及蛋白印跡技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種雙膜片蛋白質(zhì)印跡雜交儀及其實(shí)驗(yàn)操作方法，其儀器包括：殼體、傳送定位裝置、搖床裝置和雜交槽組；通過(guò)傳送定位裝置將轉(zhuǎn)膜完成的PVDF膜片依次浸入雜交槽組中的封閉液槽、一抗雜交槽、洗脫槽、二抗雜交槽及洗脫槽，完成雜交過(guò)程。采用以上方案，本發(fā)明提供的雙膜片蛋白質(zhì)印跡雜交儀，著眼于蛋白質(zhì)印跡雜交實(shí)驗(yàn)中最繁瑣的雜交過(guò)程，其儀器結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)操作便捷，減輕實(shí)驗(yàn)人員工作強(qiáng)度的同時(shí)，降低實(shí)驗(yàn)成本。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及蛋白印跡技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種雙膜片蛋白質(zhì)印跡雜交儀及其實(shí)驗(yàn)操作方法。

背景技術(shù)

蛋白質(zhì)印跡雜交(Western blot)是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中最為常用的技術(shù)之一，實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程包括蛋白電泳、蛋白轉(zhuǎn)膜、雜交、染色。蛋白電泳是將混合蛋白進(jìn)行分離的過(guò)程；轉(zhuǎn)膜是將分離好的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到作為固相支持體的PVDF膜(即聚偏二氟乙烯膜)上，便于后續(xù)進(jìn)行雜交的過(guò)程；雜交是指用抗體和靶蛋白(抗原)發(fā)生特異性結(jié)合從而對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步鑒定的過(guò)程；染色是在抗體-抗原雜交后對(duì)其通過(guò)化學(xué)發(fā)光或化學(xué)染色進(jìn)行鑒定的過(guò)程。

其中蛋白質(zhì)雜交的過(guò)程可以細(xì)分為封閉、雜交孵育和洗脫三步，即將電泳轉(zhuǎn)膜后的PVDF膜(即聚偏二氟乙烯膜)置于含脫脂奶粉或牛血清白蛋白(BSA)的封閉液中，慢速搖動(dòng)封閉，持續(xù)時(shí)間40-60分鐘；之后在含第一抗體的一抗孵育液中慢速搖動(dòng)進(jìn)行一抗孵育，持續(xù)時(shí)間60分鐘；然后用洗脫液快速搖動(dòng)洗脫3次，每次5-10分鐘；再然后在含第二抗體的二抗孵育液中慢速搖動(dòng)進(jìn)行二抗孵育，持續(xù)時(shí)間40分鐘；最后用洗脫液快速搖動(dòng)洗脫3次，每次5-10分鐘，得到符合要求的蛋白膜。其過(guò)程十分繁瑣，持續(xù)操作時(shí)間長(zhǎng)，且需要機(jī)械性的多次重復(fù)操作，花費(fèi)實(shí)驗(yàn)人員很多的時(shí)間和精力，同時(shí)，人為操作的不穩(wěn)定也容易造成試驗(yàn)結(jié)果的差異，造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不準(zhǔn)確。

目前已經(jīng)有全自動(dòng)的蛋白質(zhì)印跡雜交儀，能夠直接上樣，一體完成蛋白電泳、蛋白轉(zhuǎn)膜、雜交、染色的全過(guò)程，得到穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，極大的減輕了實(shí)驗(yàn)人員的工作強(qiáng)度。只是，這類(lèi)儀器價(jià)格十分昂貴，而且耗材也很貴，既使對(duì)于擁有較多科研經(jīng)費(fèi)的實(shí)驗(yàn)室，相關(guān)的費(fèi)用也難以承擔(dān)。如何在節(jié)約實(shí)驗(yàn)成本的情況下，提高實(shí)驗(yàn)的自動(dòng)化程度，減輕實(shí)驗(yàn)人員工作強(qiáng)度是一個(gè)難題。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明僅針對(duì)蛋白質(zhì)印跡雜交實(shí)驗(yàn)中最繁瑣的雜交過(guò)程，提出的一種雙膜片蛋白質(zhì)印跡雜交儀及其實(shí)驗(yàn)操作方法，其儀器結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)操作便捷，減輕實(shí)驗(yàn)人員工作強(qiáng)度的同時(shí)，降低實(shí)驗(yàn)成本。

一方面，本發(fā)明提供一種雙膜片蛋白質(zhì)印跡雜交儀，包括：殼體、傳送定位裝置、搖床裝置和雜交槽組；所述殼體包括：水平設(shè)置的底殼體以及一體設(shè)置在底殼體后部并垂直向上延伸的立殼體，所述立殼體的后部為敞口，并在所述敞口上設(shè)置一個(gè)可拆卸的背板。所述傳送定位裝置包括:傳送機(jī)構(gòu)和安裝在傳送機(jī)構(gòu)上的橫梁，所述橫梁水平向前延伸并突出于所述立殼體的前表面，所述傳送機(jī)構(gòu)安裝在所述背板的前板面上，并通過(guò)第一電機(jī)驅(qū)動(dòng)所述橫梁作橫向移動(dòng)，通過(guò)第二電機(jī)驅(qū)動(dòng)所述橫梁作縱向移動(dòng)的；所述橫梁的前部安裝有膜片夾。所述搖床裝置包括：搖床機(jī)構(gòu)和安裝在搖床機(jī)構(gòu)上部的槽架，所述搖床機(jī)構(gòu)固定安裝在所述底殼體的底部，驅(qū)動(dòng)所述槽架震動(dòng)搖擺；所述槽架突出于所述底殼體的上表面。所述雜交槽組垂直、可拆卸的安裝在所述槽架上，包括：十一個(gè)獨(dú)立的槽體，十一個(gè)所述槽體成排布置：第一排設(shè)置一個(gè)用于盛裝封閉液的封閉液槽；第二排并排設(shè)置兩個(gè)用于盛裝一抗孵育液的一抗雜交槽，且兩個(gè)所述一抗雜交槽的長(zhǎng)度之和與所述封閉液槽的長(zhǎng)度相等；第三排、第四排和第五排各設(shè)置一個(gè)長(zhǎng)度與所述封閉液槽相同的洗脫槽，用以盛裝洗脫液；第六排并排設(shè)置兩個(gè)用于盛裝二抗孵育液的二抗雜交槽，且兩個(gè)所述二抗雜交槽的長(zhǎng)度之和與所述封閉液槽的長(zhǎng)度相等；第七排、第八排和第九排各設(shè)置一個(gè)與所述封閉液槽長(zhǎng)度相同的洗脫槽，用以盛裝洗脫液。