[發明專利]一種免飼養細胞的雜交瘤細胞液體培養基有效
| 申請號： | 201611218063.X | 申請日： | 2016-12-26 |
| 公開（公告）號： | CN108239624B | 公開（公告）日： | 2021-12-03 |
| 發明（設計）人： | 高林;李樂;李華春;何于雯;廖德芳;姚俊 | 申請（專利權）人： | 云南省畜牧獸醫科學院 |
| 主分類號： | C12N5/20 | 分類號： | C12N5/20 |
| 代理公司： | 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262 | 代理人： | 李平;王思琪 |
| 地址： | 650224*** | 國省代碼： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 飼養 細胞 雜交瘤 液體 培養基 | ||
1.一種免飼養細胞的雜交瘤細胞液體培養基，其中：
所述雜交瘤細胞液體培養基含有：a、占總體積20％-30％的培養過L929細胞的培養液；b、占總體積20％-30％的培養過C6/36細胞的培養液；c、占總體積8％-20％的胎牛血清，
所述雜交瘤細胞液體培養基用于雜交瘤細胞的篩選、增殖；
所述培養過L929細胞的培養液是指培養過該細胞，中途沒換過液，細胞至少長滿底面的90％以上時的培養液；所述培養過C6/36細胞的培養液是指培養過該細胞，中途沒換過液，細胞至少長滿底面的90％以上時的培養液；
L929細胞使用RPMI1640完全培養基或DMEM完全培養基傳代，C6/36細胞使用M199完全培養基或MEM完全培養基傳代。
2.根據權利要求1所述的雜交瘤細胞液體培養基，其中，該雜交瘤細胞液體培養基還含有10PPM的乙基環丙沙星。
3.一種免飼養細胞的雜交瘤細胞液體培養基的制備方法，所述雜交瘤細胞液體培養基用于雜交瘤細胞的篩選、增殖，所述方法包括以下步驟：
a、分別用細胞培養瓶，按1瓶傳4瓶或5瓶的比例，正常傳代長滿的L929細胞和C6/36細胞；
b、當細胞長滿后，將兩種細胞的培養液分別收集起來，離心將細胞碎片沉淀，再將上清過濾除菌；
c、取無菌的試劑瓶，加入各占總體積20％-30％的上步制備的兩種細胞培養液、10PPM的乙基環丙沙星、和占總體積40％-50％的RPMI1640或DMEM，加入胎牛血清至100％體積；
d、搖勻，無菌封裝，避光保存。
4.根據權利要求3所述的制備方法，其中，步驟a中，L929細胞使用RPMI1640完全培養基或DMEM完全培養基傳代，C6/36細胞使用M199完全培養基或MEM完全培養基傳代。
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