[發明專利]一種催化活性得到提高的D-阿洛酮糖-3-差向異構酶的突變體及其應用

有效

• 申請號: 201611217802.3
• 申請日: 2016-12-26
• 公開（公告）號: CN108239633B
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發明（設計）人: 余允東;祝俊
• 申請（專利權）人: 上海立足生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/90
• 分類號: C12N9/90;C12N15/61;C12P19/24;C12P19/02
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 王正君;徐嘉慧

1.一種突變的D-阿洛酮糖-3-差向異構酶，其特征在于，所述突變的D-阿洛酮糖-3-差向異構酶在選自下組的位點發生突變：

在野生型的D-阿洛酮糖-3-差向異構酶的SEQ?ID?NO.:1的第73位天冬氨酸(D)、第111位酪氨酸（Y）和第188位天冬酰胺（N），所述第73位天冬氨酸(D)突變為谷氨酸（E），第111位酪氨酸（Y）突變為苯丙氨酸（F），第188位天冬酰胺（N）突變為蘇氨酸（T）；或

在野生型的D-阿洛酮糖-3-差向異構酶的SEQ?ID?NO.:1的第111位酪氨酸（Y），第188位天冬酰胺（N）和第250位甘氨酸（G），第111位酪氨酸（Y）突變為苯丙氨酸（F），第188位天冬酰胺（N）突變為蘇氨酸（T），第250位甘氨酸（G）發生突變半胱氨酸（C）；或

在野生型的D-阿洛酮糖-3-差向異構酶的SEQ?ID?NO.:1的第73位天冬氨酸(D)、第111位酪氨酸（Y），第188位天冬酰胺（N）和第250位甘氨酸（G），所述第73位天冬氨酸(D)突變為谷氨酸（E），第111位酪氨酸（Y）突變為苯丙氨酸（F），第188位天冬酰胺（N）突變為蘇氨酸（T），第250位甘氨酸（G）發生突變半胱氨酸（C）。

2.如權利要求1所述的突變的D-阿洛酮糖-3-差向異構酶，其特征在于，所述D-阿洛酮糖-3-差向異構酶來自于Paenibacillus?senegalensis。

3.如權利要求1所述的突變的D-阿洛酮糖-3-差向異構酶，其特征在于，所述突變的D-阿洛酮糖-3-差向異構酶的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.:2、4、6或8所示。

4.如權利要求1所述的突變的D-阿洛酮糖-3-差向異構酶，其特征在于，所述突變的D-阿洛酮糖-3-差向異構酶具有選自下組的一個或多個特征：

（a）催化效率≥25%；

（b）所述突變的D-阿洛酮糖-3-差向異構酶的催化活性為同等條件下的野生型D-阿洛酮糖-3-差向異構酶催化活性的3-15倍；

（c）所述突變的D-阿洛酮糖-3-差向異構酶的單位酶活≥400。

5.一種分離的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸為：

編碼如SEQ?ID?NO.:?2、4、6、8所示多肽的多核苷酸。

6.一種分離的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸為：

序列如SEQ?ID?NO.:3、5、7、9所示的多核苷酸。

7.一種分離的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸為：

核苷酸序列與SEQ?ID?NO.:3、5、7、9所示序列的同源性≥95%，且編碼SEQ?ID?NO.:2、4、6、8所示多肽的多核苷酸。

8.一種載體，其特征在于，所述載體含有權利要求5-7任一所述的多核苷酸。

9.一種宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞含有權利要求8所述的載體或在基因組中整合有權利要求5-7任一所述的多核苷酸。

10.一種產生權利要求1所述突變的D-阿洛酮糖-3-差向異構酶的方法，其特征在于，包括步驟：

在適合表達的條件下，培養權利要求9所述的宿主細胞，從而表達出所述突變的D-阿洛酮糖-3-差向異構酶；和

分離所述突變的D-阿洛酮糖-3-差向異構酶。

11.一種酶制劑，其特征在于，所述酶制劑包含權利要求1所述的突變的D-阿洛酮糖-3-差向異構酶。

12.如權利要求11所述的酶制劑，其特征在于，所述酶制劑還包括選自下組的一種或多種組分：氯化鈷、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、或其組合。