[發(fā)明專利]多膜片蛋白質(zhì)印跡雜交儀及其實(shí)驗(yàn)操作方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611217682.7
• 申請日: 2016-12-26
• 公開（公告）號: CN108241062B
• 公開（公告）日: 2020-09-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李郁;王宇;郁國宏
• 申請（專利權(quán)）人: 蘭州奧潤環(huán)境工程有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/545;G01N33/543
• 代理公司: 北京酷愛智慧知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11514
• 代理人: 孟凡臣

本發(fā)明涉及蛋白印跡實(shí)驗(yàn)設(shè)備領(lǐng)域，具體涉及一種多膜片蛋白質(zhì)印跡雜交儀及其實(shí)驗(yàn)操作方法，其儀器包括：底殼體和立殼體，立殼體內(nèi)設(shè)置有傳送定位裝置，底殼體內(nèi)設(shè)置有搖床裝置，搖床裝置的上部設(shè)置雜交槽組，該雜交槽組包括：獨(dú)立的封閉液槽、一抗雜交槽、洗脫槽和二抗雜交槽，并在洗脫槽上設(shè)置一個進(jìn)排液裝置；通過傳送定位裝置將轉(zhuǎn)膜完成的PVDF膜片依次浸入封閉液槽、一抗雜交槽、洗脫槽、二抗雜交槽，再返回洗脫槽，完成雜交過程。采用以上方案，本發(fā)明所提出的一種多膜片蛋白質(zhì)印跡雜交儀及其實(shí)驗(yàn)操作方法，儀器結(jié)構(gòu)簡單，實(shí)驗(yàn)操作方便，支持多膜片同時實(shí)驗(yàn)，能夠減輕實(shí)驗(yàn)人員工作強(qiáng)度的同時，提高工作效率，降低實(shí)驗(yàn)成本。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及蛋白印跡技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種多膜片蛋白質(zhì)印跡雜交儀及其實(shí)驗(yàn)操作方法。

背景技術(shù)

蛋白質(zhì)印跡雜交(Western blot)是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中最為常用的技術(shù)之一，實(shí)驗(yàn)操作主要是在凝膠電泳的基礎(chǔ)上，將電泳分離的蛋白質(zhì)組分從凝膠轉(zhuǎn)移至一種固相支持體上，通過抗體與附著于固相支持物的靶蛋白所呈現(xiàn)的抗原表位發(fā)生特異性免疫反應(yīng)，之后進(jìn)行染色檢測的過程。

其中讓抗體與靶蛋白發(fā)生特異性免疫反應(yīng)的蛋白質(zhì)雜交過程可以細(xì)分為封閉、雜交孵育和洗脫三步，即將電泳轉(zhuǎn)膜后的PVDF(即聚偏二氟乙烯膜)膜置于含脫脂奶粉或牛血清白蛋白(BSA)的封閉液中，慢速搖動封閉，持續(xù)時間40-60分鐘；之后在含第一抗體的一抗孵育液中慢速搖動進(jìn)行一抗孵育，持續(xù)時間60分鐘；然后用洗脫液快速搖動洗脫3次，每次5-10分鐘；接著在含第二抗體的二抗孵育液中慢速搖動進(jìn)行二抗孵育，持續(xù)時間40分鐘；最后用洗脫液快速搖動洗脫3次，每次5-10分鐘，得到符合要求的蛋白膜。其過程十分繁瑣，持續(xù)操作時間長，且需要機(jī)械性的多次重復(fù)操作，花費(fèi)實(shí)驗(yàn)人員很多的時間和精力，同時，人為操作的不穩(wěn)定也容易造成試驗(yàn)結(jié)果的差異，造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不準(zhǔn)確。

目前已經(jīng)有全自動的蛋白質(zhì)印跡雜交儀，能夠直接上樣，一站式完成蛋白電泳、轉(zhuǎn)膜、雜交、染色的全過程，得到穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，極大地減輕了實(shí)驗(yàn)人員的工作強(qiáng)度。只是，這類儀器及耗材價(jià)格十分昂貴，既使對于擁有較多科研經(jīng)費(fèi)的實(shí)驗(yàn)室，相關(guān)的費(fèi)用也難以承擔(dān)；而且，多數(shù)的儀器仍然只能進(jìn)行單片PVDF膜片的雜交試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)效率低，不能滿足有些需要多膜片同時實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)需求，適用范圍窄，支持多膜片同時實(shí)驗(yàn)的儀器，儀器價(jià)格又會在本就昂貴的價(jià)格上再次提高。因此，如何在節(jié)約實(shí)驗(yàn)成本的情況下，提高實(shí)驗(yàn)的自動化程度和工作效率，實(shí)現(xiàn)多膜片同時實(shí)驗(yàn)，減輕實(shí)驗(yàn)人員的工作強(qiáng)度，具有非常積極的意義。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述問題，本發(fā)明僅針對蛋白質(zhì)印跡雜交實(shí)驗(yàn)中最繁瑣的雜交過程，提出的一種多膜片蛋白質(zhì)印跡雜交儀及其實(shí)驗(yàn)操作方法，其儀器結(jié)構(gòu)簡單，實(shí)驗(yàn)操作方便，支持多膜片同時實(shí)驗(yàn)，能夠減輕實(shí)驗(yàn)人員工作強(qiáng)度的同時，提高工作效率，降低實(shí)驗(yàn)成本。