[發明專利]miR?665?3p抑制物在制備防治缺血再灌注損傷藥物中的應用

在審

• 申請號: 201611217632.9
• 申請日: 2016-12-26
• 公開（公告）號: CN106692175A
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發明（設計）人: 田曉峰;李振魯;姚繼紅;王廣智;封東成;李揚
• 申請（專利權）人: 大連醫科大學附屬第二醫院
• 主分類號: A61K31/7088
• 分類號: A61K31/7088;A61P9/10
• 代理公司: 大連非凡專利事務所21220
• 代理人: 閃紅霞

技術領域

本發明涉及miR-665-3p抑制物的新用途，尤其是miR-665-3p抑制物在制備防治缺血再灌注損傷藥物中的應用。

背景技術

缺血再灌注損傷是指組織缺血缺氧到達一定時間及程度后引起細胞發生病理變化，在恢復血液供應后，損傷的組織非但沒有恢復功能，反而出現進一步加重的病理現象。眾多文獻資料表明缺血再灌注損傷可能與以下若干因素有關：1. 氧自由基的生成；2. 鈣超載；3. 中性粒細胞（PMN）激活；4. 過度的細胞凋亡；5. 大量細胞因子和炎性介質的釋放。總之，缺血再灌注損傷是由各種機制相互影響，綜合作用的結果。

自噬是廣泛存在于真核生物中的一種溶酶體依賴的降解途徑，是細胞存活、生長和細胞內穩態平衡不可缺少的機制。自噬可以通過降解衰老、損傷細胞器和長半衰期蛋白維持細胞穩態，在應激環境下，適度激活自噬則可以通過再生代謝前體和清除亞細胞碎片維持細胞完整性，減輕細胞氧化應激損傷、細胞凋亡，減少炎癥因子釋放，增強細胞抵抗外界刺激的能力。

微小RNA（microRNA, miRNA）是一類真核生物中RNA聚合酶轉錄的、具有帽子結構和多聚腺苷酸尾巴的非編碼型RNA，一般長度為22-24個核苷酸。成熟的miRNA可以和特定靶基因mRNA的3’UTR區域互補結合，從而誘導沉默復合體降解靶標mRNA或阻滯其翻譯過程，最終調控靶基因的表達。miRNA可調控生物體生長發育過程中的多個病理生理過程：細胞增殖、氧化應激、細胞凋亡等。雖然最近的研究表明miRNA在細胞自噬的多個不同階段起著精細的調控作用，但是，迄今為止還沒有關于miR-665-3p抑制物在制備預防或治療缺血再灌注損傷藥物中應用的相關報道。

發明內容

本發明是發現了miR-665-3p抑制物具有預防和治療缺血再灌注損傷的作用，從而發明了miR-665-3p抑制物在制備防治缺血再灌注損傷藥物中的應用。

本發明的技術解決方案是：一種miR-665-3p抑制物在制備防治缺血再灌注損傷藥物中的應用。

所述miR-665-3p抑制物在制備防治腸道缺血再灌注損傷藥物中的應用。

所述miR-665-3p抑制物的DNA序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3所示。

本發明證實了miR-665-3p抑制物可顯著提高腸道細胞對于缺血再灌注損傷的耐受性，減輕腸道缺血再灌注損傷的嚴重程度，表現為有效緩解了發病小鼠小腸絨毛的倒伏及脫落、毛細血管的擴張及裸露等現象； miR-665-3p抑制物可顯著抑制腸道損傷標記物腸型脂肪酸結合蛋白（I-FABP）及炎性細胞因子TNF-α和IL-6的過度釋放，同時miR-665-3p抑制物對于小鼠II/R損傷后24h生存率顯著高于對照組，可應用于制備防治缺血再灌注損傷藥物。

附圖說明

圖1是LNA-miR-665-3p治療后腸道組織病理圖。

圖2是LNA-miR-665-3p治療后血清相關細胞因子的變化。

圖3是LNA-miR-665-3p對小鼠II/R損傷后LC3蛋白表達的影響。

圖4是LNA-miR-665-3p對小鼠II/R后小腸細胞原位凋亡的影響。

圖5是LNA-miR-665-3p治療對于小鼠II/R損傷24h生存率的影響。

圖6是Antagomir-665-3p處理對于Caco-2細胞H/R損傷生存率的影響。

圖7是Antagomir-665-3p處理對于Caco-2細胞H/R損傷后自噬流的影響。

圖8是Antagomir-665-3p處理對于Caco-2細胞H/R損傷后凋亡的影響。

圖9是Antagomir-665-3p處理對于Caco-2細胞H/R損傷后炎性因子釋放的影響。

具體實施方式

下述實施例中所使用的試驗方法如無特殊說明，均為常規方法。

下述實施例中所使用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑獲得。

本實驗中采用的miR-665-3p抑制物主要分為兩種：

1. 基于新型鎖核酸技術修飾的人工合成寡核苷酸序列（LNA），主要用于動物實驗。

LNA-665-3p序列如SEQ ID NO:1所示；

LNA-NC對照序列如SEQ ID NO:2所示；

LNA-miR-665-3p序列和LNA-NC對照序列均委托丹麥Exiqon生物公司合成。