[發(fā)明專利]一種應用于評估微藻二氧化碳耐受力的方法及裝置

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611217290.0
• 申請日: 2016-12-26
• 公開（公告）號: CN106706909B
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發(fā)明（設計）人: 宋立榮;盧哲;崔慧君;衛(wèi)晴;霍巖;楊子寒
• 申請（專利權）人: 中國科學院水生生物研究所
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種用于評估微藻二氧化碳耐受力的方法，其步驟是：

A、培養(yǎng)基配制：培養(yǎng)基依據(jù)目標藻株定，所述的培養(yǎng)基為BG-11，SP，DM，SE，CSI中的一種，基于孔板的二氧化碳耐受性實驗所使用的培養(yǎng)基為無碳培養(yǎng)基；

B、目標藻株活化擴培：對配制的全培養(yǎng)基進行高溫121 ，30 min滅菌，在超凈工作臺將全培養(yǎng)基分裝至光生物反應器裝置，接著往光生物反應器接入目標藻株：固體平板上刮取克隆接入全培養(yǎng)基，或從液體種子中轉接至全培養(yǎng)基進行擴培，培養(yǎng)條件為，光照強度為50~60，溫度控制在24-26，通氣培養(yǎng)7~10天；

C、目標藻株接種及OD₆₈₀檢測：檢測擴培7~10天后的藻液OD₆₈₀光密度C₁以決定接種量V₁，確定接種量V₁之后對藻液進行離心，無碳培養(yǎng)基洗凈后重懸，接入十二孔板，藻株接入OD₆₈₀光密度C₂為0.2~0.3，每孔接入體積為3 mL，共計三個平行，將十二孔板放置在培養(yǎng)缸中靜置培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光照強度為30~40，溫度控制在24-26 ，實驗組和空氣組培養(yǎng)缸二氧化碳濃度分別為1~20%和0.03%；

D、光密度OD₆₈₀檢測：檢測光密度OD₆₈₀之前，使用一次性吸管對藻液進行重懸直至藻液均勻，使用酶標儀對十二孔板中的藻液OD₆₈₀進行檢測，檢測吸光度波長為680 nm；

E、目標藻株在1~20%二氧化碳的生長力及耐受力評價：追蹤光密度OD₆₈₀變化曲線，以ODd^-1代表設定條件下的生長力，以1~20%二氧化碳條件下的光密度變化率與空氣下的光密度變化率差值代表目標藻株對高濃度二氧化碳的耐受力；

F、藻株篩選：散點作圖法，依據(jù)以OD?d^-1及deltaOD?d^-1兩個參數(shù)確定藻株在散點圖中的分布，對比后，篩選出既能耐受高濃度二氧化碳，且能在高濃度二氧化碳補給下快速生長的優(yōu)良藻株；

公式1：deltaOD-

公式2：V₁= mL

其中：deltaOD?d^-1為1~20%二氧化碳條件下的光密度變化率與空氣下的光密度變化率差值，代表目標藻株對高濃度二氧化碳的耐受力；（OD?d^-1）_1~20%CO2、（OD?d^-1）_air分別為1~20%二氧化碳組和空氣組的光密度變化率，分別代表目標藻株在1~20%二氧化碳組和空氣組的生長力；二氧化碳占比氣體總體積的1~20%；V₁為接入十二孔板所需的活化擴培后原藻液的體積；C₂為十二孔板的藻液光密度；C₁為活化擴培7~10天后的藻液光密度；mL為毫升；air為空氣組，二氧化碳體積占比氣體總體積的0.03%；

所述的目標藻株包括綠藻門、藍藻門、硅藻門中的任意一種；

其中，綠藻門是小球藻、柵藻、集星藻、纖維藻、球空星藻、葡萄鼓藻、實球藻、蹄形藻、集球藻、盤星藻、原球藻、并聯(lián)藻、月芽藻、紅球藻中的任意一種；藍藻門是聚球藻、集胞藻中的任意一種；硅藻門是小環(huán)藻、脆桿藻、窄異極藻、菱板藻、舟形藻、菱形藻、三角褐指藻、針桿藻、直鏈藻中的任意一種。