[發明專利]一種篩選耐鹽堿性植物材料的雙向電泳凝膠考馬斯亮藍染色和脫色方法

在審

• 申請號: 201611217165.X
• 申請日: 2016-12-26
• 公開（公告）號: CN106596233A
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發明（設計）人: 王曉楠;孫宇峰;曹焜;韓喜才;夏尊民;姜穎;宋鑫玲;曹鴻勛;聶迪
• 申請（專利權）人: 黑龍江省科學院大慶分院
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30;G01N1/28
• 代理公司: 哈爾濱市偉晨專利代理事務所(普通合伙)23209
• 代理人: 榮玲

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，涉及一種利用考馬斯亮藍R250快速染色雙向電泳凝膠以及脫色的方法。

背景技術

由于基因的功能主要通過其編碼的蛋白質實現，利用蛋白質組學技術詮釋基因功能被認為是后基因組研究中的最主要部分。目前，經典的蛋白質組學研究方法是制備蛋白樣品，進行雙向電泳，然后通過染色獲得清晰的蛋白質圖譜，再通過切較、酶切、質譜鑒定等技術，獲得目標蛋白質。在此過程中，根據目的蛋白的性質，可利用不同的SDS凝膠適用的檢測方法來檢測雙向凝膠，為了盡可能減少蛋白損失，提高檢測的靈敏度，染色方法一直在被不斷探索，綜合考慮靈敏度、線性范圍、方便程度、成本以及成像設備類型等條件基礎上進行選擇。目前常用的雙向電泳染色方法為考馬斯亮藍染色、銀染以及熒光染色。銀染的靈敏度高，但容易產生很高的背景，造成蛋白分辨損失，且費時費力、費用高和需要更多地接觸有毒化學物質。熒光染色雖然具有高靈敏度、背景低、與質譜匹配，但需要特別的掃描儀和熒光染料，所以存在染色成本較高的問題。

發明內容

本發明的目的是提供一種篩選耐鹽堿性植物材料的雙向電泳凝膠考馬斯亮藍染色和脫色方法。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：

一種篩選耐鹽堿性植物材料的雙向電泳凝膠考馬斯亮藍染色和脫色方法，包括如下步驟：

步驟一、染色液的配制：配制含有0.1～0.15wt％考馬斯亮藍R250、40～50vol％甲醇、10～20vol％乙酸、蒸餾水定容的染色液，混勻后靜置0.5～1.5小時，過濾后室溫保存備用。根據凝膠大小，調整染色液用量。

步驟二、脫色液的配制：配制含有20～30vol％乙醇、10～15vol％乙酸、蒸餾水定容的脫色液。

步驟三、染色：雙向SDS凝膠蒸餾水沖洗2～3次，放入染色盒中，加入染色液，染色液沒過凝膠即可；利用保鮮膜封口，室溫條件下，搖床上染色2～3小時。

步驟四、脫色：倒出染色液，蒸餾水沖洗凝膠3～4次；加入脫色液，脫色液用量為染色液用量的1～2倍，室溫條件下，搖床上脫色2～3小時，蒸餾水沖洗3～4次。

本發明具有如下優點：

1、該方法試用范圍廣，對于多數被子植物如鹽芥、擬南芥、麻類作物以及孢子植物如卷柏等都具有較好的效果。

2、本發明在常規技術方法上進一步優化，省略掉前固定等程序，染色和脫色速度快、效果好。

3、此方法操作更為簡單易行、成本低、凝膠背景清晰，具有較高的靈敏度。

附圖說明

圖1為染色效果圖。

具體實施方式

下面結合附圖對本發明的技術方案作進一步的說明，但并不局限于此，凡是對本發明技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的精神和范圍，均應涵蓋在本發明的保護范圍中。

具體實施方式一：本實施方式提供了一種篩選耐鹽堿性植物材料的雙向電泳凝膠考馬斯亮藍染色和脫色方法，具體實施步驟如下：

步驟一、染色液的配制：配制含有0.1～0.15wt％考馬斯亮藍R250、40～50vol％甲醇、10～20vol％乙酸、蒸餾水定容的染色液，混勻后靜置0.5～1.5小時，過濾后室溫保存備用。根據凝膠大小，可調整染色液用量。

步驟二、脫色液的配制：配制含有20～30vol％乙醇、10～15vol％乙酸、蒸餾水定容的脫色液。

步驟三、染色：雙向SDS凝膠蒸餾水沖洗2～3次，輕輕放入染色盒中，緩緩加入染色液，染色液沒過凝膠即可；利用保鮮膜封口防止溶液揮發，室溫條件下，搖床上緩慢搖動染色2～3小時。

步驟四、脫色：倒出染色液，蒸餾水沖洗凝膠3～4次；緩緩加入脫色液，脫色液用量為染色液用量的1～2倍即可，室溫條件下，搖床上緩慢搖動脫色2～3小時，蒸餾水沖洗3～4次。

具體實施方式二：本實施方式與具體實施方式一不同的是，步驟一替換為：配制含有0.1～0.15wt％考馬斯亮藍R250、30～40vol％乙醇、10～15vol％乙酸、蒸餾水定容的染色液，混勻后靜置0.5～1.5小時，過濾后室溫保存備用。

具體實施方式三：本實施方式與具體實施方式一不同的是，步驟四替換為：倒出染色液，蒸餾水沖洗凝膠3～4次，緩緩加入脫色液，脫色液用量為染色液用量的1～2倍即可，室溫條件下，搖床上緩慢搖動脫色1～2小時。蒸餾水沖洗3～4次后，根據凝膠脫色情況，加入含有5～8vol％乙醇、8～10vol％乙酸的脫色液，進行第二次脫色，搖床上緩慢搖動脫色1～2小時。