[發明專利]犬用干細胞分泌因子注射劑

在審

• 申請號: 201611216726.4
• 申請日: 2016-12-26
• 公開（公告）號: CN106727704A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 嚴玉霖;陳玲;汪登如
• 申請（專利權）人: 云南農業大學
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61K9/08;A61K9/14;A61K47/36;A61P7/06;A61P7/00;A61P25/00;A61P1/16;A61P13/12;A61P19/02;A61P29/00
• 代理公司: 昆明祥和知識產權代理有限公司53114
• 代理人: 和琳

技術領域

本發明涉及犬干細胞技術領域，特別涉及一種干細胞分泌因子注射劑及其制備方法和應用。

背景技術

間充質干細胞(MSCs)是存在于骨髓、脂肪、臍帶或胎盤中的具有高度自我更新能力和多相分化潛能的成體干細胞，又稱為基質干細胞或間充質祖細胞。造血干細胞(HSCs)是血液系統中的成體干細胞，來源于骨髓、臍帶血、胎盤，具有長期自我更新的能力和分化成各類成熟血細胞的潛能。MSCs和HSCs不僅具有高度可塑性和強大的分化潛能，而且具有易獲得、易培養、低免疫原性等特性，在修復和治療神經系統損傷、肝腎損傷、血液系統疾病、糖尿病、骨損傷、免疫性疾病和心血管疾病等方面具有一定的優勢，近年來在基礎研究領域、臨床組織器官修復領域和疾病治療領域呈現出極為誘人的前景。

MSCs和HSCs不但可以產生或分泌大量的生物活性因子，而且MSCs內也含有豐富的生物活性物質，這些干細胞生物活性因子或物質可有效調控機體細胞信號傳導、活化機體干細胞，進而生理性修復或替代機體損傷、病變及衰老的細胞等。例如MSCs和HSCs可以分泌干細胞生長因子 ( SCF )、神經生長因子 ( NGF )、基質細胞源性生長因子 ( SDF )、血管內皮細胞生長因子 ( VEGF )、堿性成纖維細胞生長因子 ( bFGF )、胰島素樣生長因子 ( IGF )、表皮生長因子( EGF )、白介素-6 與白介素-7( IL-6 與 IL-7 )、巨核細胞集落刺激因子( M-CSF )、腫瘤壞死因子 ( TNF )、干擾素 ( IFN ) 等80余種活性因子，這些干細胞活性因子具有支持干/祖細胞的增殖與分化、化學趨化、免疫調節、抗細胞凋亡、促進血管發生、抗瘢痕等功能。他們通過自分泌或旁分泌的方式，改善機體局部微環境，促進內源性干細胞向受損部位進行遷移和分化，挽救瀕臨凋亡的組織細胞，從而達到修復組織器官、恢復各組織器官功能的目的。

發明內容

本發明提供了一種犬干細胞注射劑的制備方法及其應用。該犬干細胞注射劑在治療犬貧血、犬白細胞減少癥、犬非感染性中樞神經系統損傷、肝功能損傷、腎功能損傷、糖尿病、犬退行性關節炎、關節軟骨缺損等疾病具有獨特優勢，顯著縮短療程，提高患犬生活質量且無任何副作用，同時對于體質衰弱的老年犬也具有增強體質和抗病力的作用。

本發明犬用干細胞分泌因子注射劑，其特征在于其注射劑中含有犬干細胞分泌因子原液，該原液由A液和B液按3:1的體積比混合而成；其中，A液為犬干細胞裂解液，B液為犬MSCs和HSCs無血清培養上清液融化、混合、低溫分離、超濾和濃縮后形成。

所述的犬用干細胞分泌因子注射劑，其特征在于犬干細胞分泌因子原液中，按質量，加入原液0.5%-1%的甘氨酸，0.2%-0.5%的黃芪多糖，0.3%-0.6%的香菇多糖。

所述的犬用干細胞分泌因子注射劑，其特征在于按質量，加入原液0.15%-0.2%的甲鈷胺，0.3-0.5%的維生素B1，0.05-0.1%的維生素B12。

所述的犬干細胞分泌因子注射劑是注射液或是注射用凍干粉。

所述的犬干細胞分泌因子注射用凍干粉是用真空冷凍干燥機經真空濃縮、噴霧干燥，得到犬干細胞分泌因子凍干粉。使用時注射用生理鹽水進行稀釋，每100ml生理鹽水中添加犬干細胞分泌因子注射用凍干粉80mg。

所述的犬用干細胞分泌因子注射劑，其特征在于該犬干細胞分泌因子原液是通過以下的步驟制備而得：

（1）犬干細胞裂解液的制備：將體外培養獲得的MSCs和HSCs混合密封于凍存管中，經超低溫液氮反復凍融至細胞破碎，再經中空纖維超濾柱超濾，再用濾膜過濾，使其無菌，測定蛋白濃度，調整濃度為0.5mg/ml，標記為A液；

（2）將收集后的犬MSCs和HSCs無血清培養上清液融化、混合、低溫分離、超濾和濃縮；利用超濾膜過濾濃縮，再經中空纖維超濾柱超濾，將超濾后的液體進行濃縮，用濾膜過濾，使其無菌，測定蛋白濃度，定濃度為0.5mg/ml，4℃保存，標記為B液；

（3）將上述A液和B液按3：1的體積比混合，得到犬干細胞分泌因子原液。