[發明專利]一種黑耳中伴生菌炭角菌的分離純化方法

在審

• 申請號: 201611216139.5
• 申請日: 2016-12-26
• 公開（公告）號: CN106834134A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發明（設計）人: 李傳華;張勁松;宋曉霞;陳明杰;楊瑞恒
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/02;C12R1/645
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所31233
• 代理人: 黃志達,魏峯

技術領域

本發明屬于真菌分離純化領域，特別涉及一種黑耳中伴生菌炭角菌的分離純化方法。

背景技術

西藏一種黑耳Exidia sp.真菌是木耳科Auriculariaceae中的一種珍惜可食用的野生物種。因其風味獨特，營養豐富而廣受當地百姓喜愛，目前在西藏，此種珍惜黑耳每公斤售價達到3800元/公斤，且供不應求。因此研究此種黑耳的人工栽培成為一個亟需的熱門研究工作。

目前研究發現炭角菌是黑耳中的一種伴生菌，因此，如何得到黑耳中伴生菌炭角菌，獲知炭角菌和黑耳的關系成為了一個新的課題。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種黑耳中伴生菌炭角菌的分離純化方法，該方法分離純化工藝簡單，成本低，可以有效從黑耳中得到炭角菌，具有良好的應用前景。

本發明的一種黑耳中伴生菌炭角菌的分離純化方法，包括：

于薔薇科植物林中，采集有黑耳子實體發生的枝條，對黑耳子實體表面進行消毒，隨后放置于滅菌后的純凈水中清洗，取子實體組織塊放置于培養基中，避光培養，得到黑耳的伴生菌，即炭角菌；其中，培養基的組成為葡萄糖20g、氯化鈣0.05g、硫酸鎂0.15g、氯化鈉0.025g、磷酸氫二鉀0.25g、1％氯化鐵溶液1.2ml、瓊脂20g、維生素B₁100mg、麥芽汁10g、牛肉膏5g、蒸餾水1000ml，調節pH至6。

所述消毒具體為放置于84消毒液中消毒2min。

所述避光培養溫度為18-23℃，時間為3-5天。

所述得到的炭角菌通過ITS序列測序驗證。

有益效果

本發明分離純化工藝簡單，成本低，可以有效從黑耳中得到炭角菌，具有良好的應用前景。

附圖說明

圖1為野生黑耳的子實體照片。

具體實施方式

下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發明講授的內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。

實施例1

(1)黑耳子實體的采集

于薔薇科植物林中，將有黑耳Exidia sp.真菌子實體發生的枝條采集后，放置于透氣的籃子中，室備用。

(2)對黑耳子實體表面進行消毒，去除雜菌

將野生黑耳子實體放置于84消毒液中消毒2min，后取出放置于滅菌后的純凈水中1min，用滅菌的吸水紙把子實體上的水清洗干凈；

(3)用鑷子取子實體組織塊，放置于事先配制并滅菌的培養基中，置于18-23℃無光照溫室中培養3-5天，得到炭角菌；其中，培養基的組成為葡萄糖20g、氯化鈣0.05g、硫酸鎂0.15g、氯化鈉0.025g、磷酸氫二鉀0.25g、1％氯化鐵溶液1.2ml、瓊脂20g、維生素B₁100mg、麥芽汁10g、牛肉膏5g、蒸餾水1000ml，調節pH至6。

(4)菌種的鑒定

對獲得的菌種進行ITS序列測序，再與Genbank中的序列進行Blast比對，發現所測序列與炭角菌序列相似度達96％以上，則判定此菌為炭角菌，而非黑耳菌種。