[發明專利]一種維持CIK細胞高殺傷力的凍存保護劑

有效

• 申請號: 201611214652.0
• 申請日: 2016-12-26
• 公開（公告）號: CN106577635B
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 蘇橋生物（蘇州）有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 上海市匯業律師事務所 31325
• 代理人: 王函

本發明公開了一種維持CIK細胞高殺傷力的凍存保護劑，所述凍存保護劑由RPMI 1640、胎牛血清和二甲基亞砜、環狀六肽Cyclo(?Gly?Thr?Phe?Leu?Tyr?Ala?)組成；RPMI 1640、胎牛血清和二甲基亞砜按照體積比6:3:1混合；所述環狀六肽Cyclo(?Gly?Thr?Phe?Leu?Tyr?Ala?)的濃度為2?4μg/ml。本發明凍存保護劑能在保證CIK細胞凍存復蘇率的基礎上最大限度維持CIK細胞的高殺傷力，延續miRNA?146a低表達所帶來的強殺傷力。

技術領域

本發明屬于免疫領域，涉及CIK細胞的培養，具體涉及一種維持CIK細胞高殺傷力的凍存保護劑。

背景技術

申請人于2016年12月22日提交了一件CIK細胞培養的專利申請，該申請公開了miRNA-146a及其抑制劑在CIK細胞培養方面的應用，miRNA-146a可以作為藥物靶標提高CIK細胞對腫瘤細胞的殺傷力。該申請的說明書公開了miRNA-146a下調表達的CIK細胞比miRNA-146a正常表達的CIK細胞具有更高的殺傷力，且差異非常顯著。申請人還發現，環狀六肽Cyclo(-Gly-Thr-Phe-Leu-Tyr-Ala-)為miRNA-146a的有效抑制劑。

出于實驗需要，研究人員通常需要將細胞進行凍存，以便日后復蘇使用。申請人發現，miRNA-146a低表達的CIK細胞在凍存前雖然對白血病細胞的殺傷力非常高，但是，凍存復蘇后殺傷力明顯下降。這表明，傳統的細胞凍存保護劑可能不適用于miRNA-146a低表達CIK細胞的凍存，雖然能維持其復蘇率，但是不能維持其對白血病細胞的殺傷力。

傳統的細胞凍存保護劑多為基于DMSO的標準凍存液，由培養基、胎牛血清和DMSO組成。申請人在CIK細胞常用凍存保護劑基礎上[RPMI 1640、胎牛血清和二甲基亞砜按照體積比5:4:1混合，可參見文獻：凍存對細胞因子誘導的殺傷細胞免疫表型及細胞內因子表達的影響，鄭州大學學報(醫學版)2014年1月]進行了優化研究，試圖在保證CIK細胞凍存復蘇率的基礎上最大限度維持CIK細胞的高殺傷力。

發明內容

本發明旨在克服背景技術中存在的不足，提供一種維持CIK細胞高殺傷力的凍存保護劑，在保證CIK細胞凍存復蘇率的基礎上最大限度維持CIK細胞的高殺傷力。

本發明通過如下技術方案得以實現：

一種維持CIK細胞高殺傷力的凍存保護劑，由RPMI 1640、胎牛血清和二甲基亞砜、環狀六肽Cyclo(-Gly-Thr-Phe-Leu-Tyr-Ala-)組成。

優選地，RPMI 1640、胎牛血清和二甲基亞砜按照體積比6:3:1混合。

優選地，所述環狀六肽Cyclo(-Gly-Thr-Phe-Leu-Tyr-Ala-)的濃度為2-4μg/ml。

使用上述凍存保護劑凍存CIK細胞的方法：首先于4℃冰箱中放置1h，然后-20℃冰箱中放置2h，轉至-80℃低溫冰箱放置。

本發明優點：

本發明凍存保護劑能在保證CIK細胞凍存復蘇率的基礎上最大限度維持CIK細胞的高殺傷力，延續miRNA-146a低表達所帶來的強殺傷力。

附圖說明

圖1為不同組效應細胞對白血病K562/A02細胞系的殺傷活性；

圖2為不同組效應細胞對白血病THP-1細胞系的殺傷活性；

圖3為不同組效應細胞對白血病HL-60細胞系的殺傷活性。

具體實施方式

為了更好地解釋本發明的技術方案，下面結合具體實施例進一步介紹。實施例中未特別強調的實驗材料均為常規實驗材料，屬于本領域技術人員易于獲得的范疇。