[發明專利]一種從地溝油樣品中富集蛋白質樣品及其含量測定的新方法

有效

• 申請號: 201611213592.0
• 申請日: 2016-12-23
• 公開（公告）號: CN108241035B
• 公開（公告）日: 2020-12-15
• 發明（設計）人: 王驪麗;李維敏;李建軍
• 申請（專利權）人: 西北大學
• 主分類號: G01N30/90
• 分類號: G01N30/90
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種從地溝油樣品中富集蛋白質樣品的方法，其特征在于包括以下步驟：

( 1)一種從不同油脂中富集蛋白的預處理方法；

(2)高效反相液相色譜法對從油脂富集蛋白樣品的分析；

(3)SDS-15％PAGE對從油脂富集蛋白樣品的分析；

(4)富集油脂中蛋白質含量的測定；

步驟(2)中，將50-100mL富集固體蛋白樣品分成兩份，加入70％四氫呋喃溶液溶解，其中一份加入10-20μL 1.0mg/mL標準的溶菌酶溶液，經離心處理，取上清液用于HPRPLC分析；色譜條件為島津VP-ODS C18色譜柱，流動相A為純水，所述流動性A中還含0.1％TFA，B為乙腈，所述流動性B中還含0.1％TFA，在流速1.0mL/min，波長280nm條件下，取50μL的樣品直接進樣至已用95％A平衡過的色譜柱上，然后進行30min線性梯度洗脫至流動相B為100％，并持續洗脫10min。

2.根據權利要求1所述的從地溝油樣品中富集蛋白質樣品的方法，其特征在于：步驟(1)中，稱取40-50g油脂樣品于250mL燒杯中，在18℃下放置1-2小時，然后向燒杯中加入4℃、80-100mL丙酮，攪拌均勻后，將該混合液于4℃下放置0.5-1小時，用布氏漏斗抽濾混合液，抽濾時所使用的濾紙為Whatman NO.1濾紙，直徑85mm，孔徑11μm，將抽濾后的濾紙放入燒杯中，加入5-15mL四氫呋喃，震蕩，然后將該濾紙放入另一只燒杯，加入5-15mL二氧六環，震蕩，合并兩次提取液，用氮氣吹干，富集到油脂中的蛋白。

3.根據權利要求1所述的從地溝油樣品中富集蛋白質樣品的方法，其特征在于：步驟(3)中，富集固體蛋白樣品分別加入電泳的載樣緩沖50-100μL，震蕩混合均勻，沸水中煮3～5min，離心后即可上樣，考馬斯亮藍R-250染色、脫色，用雙波長薄層掃描儀分析電泳條帶。

4.根據權利要求1所述的從地溝油樣品中富集蛋白質樣品的方法，其特征在于：步驟(4)中，50-100mL富集固體蛋白樣品加入70％四氫呋喃溶液溶解，以牛血清白蛋白為標準，利用Bradford法測定樣品中蛋白質含量；改進蛋白質含量測定的Bradford法，即在測定溶液中加入四氫呋喃促進脂溶性蛋白質的溶解度，該方法在1～60μg范圍內呈良好的線性關系，R2＝0.9880，靈敏度高。