[發明專利]一種封閉群五指山小型豬遺傳質量檢測的方法

有效

• 申請號: 201611209526.6
• 申請日: 2016-12-23
• 公開（公告）號: CN106755417B
• 公開（公告）日: 2020-08-25
• 發明（設計）人: 孫瑞萍;魏立民;晁哲;劉海隆;王峰;鄭心力;黃麗麗
• 申請（專利權）人: 海南省農業科學院畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙) 11491
• 代理人: 姜彥

1.一種封閉群五指山小型豬遺傳質量檢測的方法，其特征在于，所述封閉群五指山小型豬遺傳質量檢測的方法包括以下步驟：

步驟一，五指山豬采集60份耳皮膚組織樣，樣本置于1.5mL消毒離心管中，帶回實驗室，-20℃冰箱保存備用；

步驟二，五指山豬基因組DNA按照天根DNA提取試劑盒中的方法提取，溶于TE中，-20℃保存；用瓊脂糖凝膠電泳和NanoDrop2000雙重檢測DNA的純度和濃度；

步驟三，33個微衛星標記引物進行多重PCR擴增；33個微衛星標記為OPEN、S0005、S0007、S0036、S0062、S0068、S0070、S0091、S0218、SW2、SW29、SW61、SW81、SW205、SW240、SW271、SW787、SW857、SW886、SW902、SW911、SW919、SW936、SW974、SW1066、SW1089、SW1092、SW1119、SW1374、SW2409、SWR158、SWR1008、SWR1120；

步驟四，將多重PCR產物進行基因掃描，使用Genemapper軟件分析SSR數據，標定片段大小和基因型；

步驟五，運用Popgene32軟件對數據進行統計分析將所有樣本的每個微衛星位點的基因型以ab，bb形式輸入Popgene32軟件的數據文件；

所述五指山豬按照隨機交配原則進行封閉繁育近20年，已繁育至3代以上。

2.如權利要求1所述的封閉群五指山小型豬遺傳質量檢測的方法，其特征在于，所述多重PCR擴增的PCR反應體系為20μ l，DNA模板1.0μ l、Taq Buffer 2.5μ l、dNTP 10mM 0.5μl、上游 引物0.5μ l、下游引物0.5μ l、TaqaDNA聚合酶0.5μ l，最后補H₂O至20μ l；反應條件為：95℃預變性3min，95℃變性30s,60℃退火30s,72℃延伸30s,進行10個循環；95℃變性30s，55℃退火30s,72℃延伸30s，進行20個循環；最后72℃修復延伸6min。

3.如權利要求1所述的封閉群五指山小型豬遺傳質量檢測的方法，其特征在于，所述步驟五中計算樣品在各微衛星位點上的基因頻率、平均觀察等位基因數、平均有效等位基因數、香隆指數、平均有效雜合度；利用Cervus 3.0軟件計算群體P值。