[發(fā)明專利]懸浮BHK21細胞相關疫苗生產(chǎn)的二階培養(yǎng)工藝技術

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611209382.4
• 申請日: 2016-12-23
• 公開（公告）號: CN108239625A
• 公開（公告）日: 2018-07-03
• 發(fā)明（設計）人: 羅順;蔡仕君;趙志欣;王嘉琪
• 申請（專利權(quán)）人: 甘肅健順生物科技有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00
• 代理公司: 北京律智知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11438
• 代理人: 于寶慶;王瑩

1.一種懸浮BHK21細胞相關疫苗生產(chǎn)的二階培養(yǎng)方法，其包含如下步驟：

1)細胞生長：細胞在生長培養(yǎng)基中生長至2X10⁶/mL-20X10⁶/mL；

2)接毒：接毒量在10^-1-10^-5之間；

3)稀釋/補加生產(chǎn)培養(yǎng)基：用生產(chǎn)培養(yǎng)基稀釋1-5倍，稀釋后細胞密度到1X10⁶/mL-10X10⁶/mL；

4)二次生長：細胞二次生長，

其中步驟2)和步驟3)不分先后，既可以先進行步驟2)，也可以先進行步驟3)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的懸浮BHK21細胞相關疫苗生產(chǎn)的二階培養(yǎng)方法，其中BHK21細胞生長為懸浮罐培養(yǎng)，培養(yǎng)工作體積為30L及以上，和/或其中生長培養(yǎng)基與生產(chǎn)培養(yǎng)基為相同的培養(yǎng)基或不同的培養(yǎng)基，優(yōu)選地，生長培養(yǎng)基和生產(chǎn)培養(yǎng)基為相同的培養(yǎng)基，優(yōu)選地，生長培養(yǎng)基和生產(chǎn)培養(yǎng)基都為CD BHK21細胞培養(yǎng)基(Gibco)或VM09細胞培養(yǎng)基(JSB-DP126)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的懸浮BHK21細胞相關疫苗生產(chǎn)的二階培養(yǎng)方法，其中步驟1)中細胞密度在6X10⁶/mL-18X10⁶/mL，優(yōu)選地，9X10⁶/mL-15X10⁶/mL，最優(yōu)選地，12X10⁶/mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1到3任一項所述的懸浮BHK21細胞相關疫苗生產(chǎn)的二階培養(yǎng)方法，其中步驟2)中細胞接毒量在10^-1-10^-4之間，更優(yōu)接地，10^-1-10^-3，最優(yōu)接地，10^-2。

5.根據(jù)權(quán)利要求1到4任一項所述的懸浮BHK21細胞相關疫苗生產(chǎn)的二階培養(yǎng)方法，其中步驟3)中BHK21細胞生產(chǎn)培養(yǎng)基稀釋為1-4倍，更優(yōu)選地，1-3倍稀釋，最優(yōu)選為2倍稀釋。

6.根據(jù)權(quán)利要求1到5任一項所述的懸浮BHK21細胞相關疫苗生產(chǎn)的二階培養(yǎng)方法，其中步驟3)中接毒后細胞密度在1X10⁶/mL-8X10⁶/mL，優(yōu)選地，1X10⁶/mL-5X10⁶/mL，最優(yōu)選地，3X10⁶/mL。

7.根據(jù)權(quán)利要求1到6任一項所述的懸浮BHK21細胞相關疫苗生產(chǎn)的二階培養(yǎng)方法，其中BHK21細胞為疫苗生產(chǎn)所用的懸浮細胞，或由貼壁馴化而來、能夠懸浮生長生產(chǎn)的懸浮細胞。

8.根據(jù)權(quán)利要求1到7任一項所述的懸浮BHK21細胞相關疫苗生產(chǎn)的二階培養(yǎng)方法，其中病毒為在對應懸浮BHK21細胞上敏感、能夠生產(chǎn)出對應疫苗的病毒，優(yōu)選地，病毒選自口蹄疫病毒、偽狂犬病毒、豬乙型腦炎、動物藍舌病毒、犬呼腸3型病毒或水皰性口炎病毒。

9.根據(jù)權(quán)利要求1到8任一項所述的懸浮BHK21細胞相關疫苗生產(chǎn)的二階培養(yǎng)方法，其中細胞生長溫度在35℃-37℃，接毒后病毒生產(chǎn)溫度在30℃-37℃。

10.根據(jù)權(quán)利要求1到9任一項所述的懸浮BHK21細胞相關疫苗生產(chǎn)的二階培養(yǎng)方法，其中細胞生長接種密度在0.3X10⁶/mL-1.0X10⁶/mL，生長天數(shù)在3-8天達到最高細胞密度。