[發明專利]與蘋果斑點落葉病抗性相關的SNP分子標記及其應用

有效

• 申請號: 201611209258.8
• 申請日: 2016-12-23
• 公開（公告）號: CN106701941B
• 公開（公告）日: 2020-06-30
• 發明（設計）人: 李天忠;張秋雷;張懿
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京衛平智業專利代理事務所(普通合伙) 11392
• 代理人: 張新利

本發明提供一種與蘋果斑點落葉病抗性相關的SNP分子標記，所述SNP分子標記位于用于調控蘋果斑點落葉病抗性的miRNA初級轉錄本Md?MIRLn12?277的啟動子上，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，該序列的378bp處堿基為T的蘋果品種對蘋果斑點落葉病的抗性顯著高于此處堿基為G的蘋果品種?？蓪⑵渥鳛樘O果屬栽培品種對蘋果斑點落葉病抗性的分子標記，用于篩選蘋果斑點落葉病抗性資源和選育抗性蘋果品種。

技術領域

本發明涉及植物分子生物學領域，具體地說，涉及一種與蘋果斑點落葉病抗性相關的SNP分子標記及其應用。

背景技術

蘋果斑點落葉病是蘋果最主要真菌性病害之一，可通過向葉片釋放各類毒力因子和效應因子影響植物代謝，使葉片出現過氧化物積累和細胞死亡。一系列研究表明，植物的抗病機制是病原菌侵入植物時，首先是位于細胞質膜的受體激酶會在識別病原菌后激活下游MAPK等信號途徑使植物產生抗病性(PTI途徑)；由于植物的抗病性使得病原菌會進化出一系列效應因子來克服植物的抗病性；為了識別病原菌的效應因子，植物也演化出一系列抗病基因(R基因)，激活抗病反應(ETI途徑)，而miRNA是調控抗病基因的重要調控因子。

傳統方法采用藥劑防治病害會影響食品安全或造成環境污染。通過設計特異性引物進行PCR擴增并測序的鑒定方法可篩選蘋果斑點落葉病抗性資源，選育抗性蘋果品種是解決這一問題的最有效途徑。

發明內容

本發明的目的是提供一種與蘋果斑點落葉病抗性相關的SNP分子標記及其應用。

本發明以感病品種‘金冠’為試材利用miRNA二代測序篩選出接種蘋果斑點落葉病Alternaria Alternariaf.spmali(ALT1)前后表達差異2倍以上的miRNA，獲得一個新的miRNA，將其命名為Md-miRLn12(SEQ ID NO:5)。由于蘋果感病品種葉片接種ALT1后Md-miRLn12及其初級轉錄本Md-MIRLn12-277表達會明顯升高，但抗性品種無顯著變化；因此克隆比較了二者Md-MIRLn12-277及其啟動子區，發現抗性品種與感病品種Md-MIRLn12-277序列相同，但啟動子區存在3個堿基不同，其中-1186bp SNP位點是決定Md-MIRLn12-277啟動子活性的位點。因此，發明人通過這個SNP位點開發了選育抗斑點落葉病蘋果品種的分子標記。

為了實現本發明目的，本發明與蘋果斑點落葉病抗性相關的SNP分子標記，所述SNP分子標記位于用于調控蘋果斑點落葉病抗性的Md-miRLn12的初級轉錄本Md-MIRLn12-277的啟動子上，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，該序列的378bp處堿基為T的蘋果品種對蘋果斑點落葉病的抗性顯著高于此處堿基為G的蘋果品種。用于調控蘋果斑點落葉病抗性的Md-miRLn12的初級轉錄本Md-MIRLn12-277的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

本發明還提供用于檢測所述與蘋果斑點落葉病抗性相關的SNP分子標記的引物，包括正向引物F5’-AACACAGGGAGCACTTCTATTG-3’和反向引物R5'-GTCCGTTATTATACGAATAATTGG-3'。

本發明還提供所述與蘋果斑點落葉病抗性相關的SNP分子標記在鑒定蘋果斑點落葉病抗性品種及感病品種中的應用，包括以下步驟：

1)提取待測蘋果植株的基因組DNA；

2)以待測蘋果植株的基因組DNA為模板，利用所述引物F和R，進行PCR擴增反應；

3)檢測PCR擴增產物，如果擴增產物序列中378bp處的堿基為T，則待測蘋果植株屬于蘋果斑點落葉病抗性品種；如果擴增產物序列中378bp處的堿基為G，則待測蘋果植株屬于蘋果斑點落葉病感病品種。