[發明專利]分泌抗大麥黃矮病毒PAV株系單抗雜交瘤細胞株及其單抗應用

有效

• 申請號: 201611207954.5
• 申請日: 2016-12-23
• 公開（公告）號: CN106636008B
• 公開（公告）日: 2019-04-09
• 發明（設計）人: 吳建祥;周雪平;張明皓
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/10;G01N33/577;G01N33/569
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高;傅朝棟

本發明公開了一種分泌抗大麥黃矮病毒PAV株系單抗雜交瘤細胞株及其單抗的應用。用提純的大麥黃矮病毒(BYDV)PAV株系病毒粒子為抗原免疫BALB/c小鼠，經細胞融合、篩選、克隆，獲得1株能穩定傳代并分泌抗BYDV PAV的單抗雜交瘤細胞株24G4，其保藏號為CGMCC No.13298。該雜交瘤細胞株分泌的單抗腹水間接ELISA效價達到10^?9，抗體類型及亞類為IgG1、kappa鏈。利用單抗24G4為核心建立檢測小麥植物中BYDV PAV的ACP?ELISA和dot?ELISA方法，這兩種方法檢測病葉的靈敏度分別達到1:81 920和1:1 280倍稀釋(w/v,g/mL)。雜交瘤細胞株24G4及其單抗的獲得和血清學檢測方法的建立為該病毒病的檢測、診斷及科學防控提供了物質和技術支撐。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種分泌抗大麥黃矮病毒PAV株系單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其單抗的應用。

背景技術

由大麥黃矮病毒(Barley yellow dwarf viruses,BYDVs)引起的小麥黃矮病(Wheat yellow dwarf disease)是小麥上重要的病毒病害之一。該病害最早由Oswald和Houston于1951年在美國加利福尼亞州的大麥上發現。目前，小麥黃矮病毒在世界各地均有分布。1960年，BYDVs首次出現在我國西北地區，受到BYDVs侵染的小麥一般減產40％，嚴重的可達70％以上，因此BYDVs又被稱為“小麥癌癥”、“黃色瘟疫”。自首次發現以來，小麥黃矮病在20世紀60-80年代又大規模爆發流行了數次，給我國小麥生產和糧食安全帶來了重大威脅。

BYDVs在小麥秋苗期和春季返青后均可侵染植株，典型癥狀是新葉從葉尖開始發黃，植株變矮，葉片顏色為金黃色到鮮黃色，黃化部分約占全葉的1/3-1/2。秋苗期感病的植株矮化明顯，分蘗減少，一般不能安全越冬。即使能越冬存活，一般也不能抽穗。穗期感病的植株一般只旗葉發黃，呈鮮黃色，植株矮化不明顯，能抽穗，但千粒重減少，根系淺，易拔起。

BYDVs寄主范圍較廣，目前已知至少可以侵染150多種禾本科作物和雜草，其主要寄主作物既包括小麥、玉米和水稻世界三大糧食作物，也包括大麥、燕麥和黑麥等具有較高經濟價值的糧食作物。雖然BYDVs寄主范圍廣泛，但都集中在單子葉植物范圍內，在自然條件下尚未發現能夠被BYDVs侵染的雙子葉植物。根據寄主范圍、對寄主的毒性、蚜蟲傳播特異性與反應類型等特點，Rochow等將美國的BYDVs分為MAV、PAV、RPV、RMV和SGV 5個株系。在中國，周廣和等篩選鑒定出了4個BYDVs株系，即PAV、RMV、GPV和GAV。BYDVs屬黃癥病毒科(Luteoviridae)，是一種+ss RNA病毒。病毒粒子由正單鏈RNA和外殼蛋白組成，呈正二十面體(T＝3)，無包膜。目前，根據國際病毒分類委員會關于病毒的分類，BYDVs分布于黃癥病毒科(Luteoviridae)的2個屬8個種，且還有2個種未被劃分到屬。在10個種中，BYDV PAV、BYDVPAS、BYDV MAV、BYDV ker II和BYDV ker III這5個種屬于黃癥病毒屬(Luteovirus)；原RPV株系被升級為Cereal yellow dwarf virus-RPV(CYDV RPV)，并和CYDV RPS和MYDV RMV這2個種一起被劃分到馬鈴薯卷葉病毒屬(Polerovirus)中；另外，BYDV GPV和BYDV SGV兩個種未歸類。這些引起大麥黃矮病的各種病毒株系間的核酸同源性非常的低，其實是完全不同的病毒，由于命名的習慣現在還叫大麥黃矮病毒。

據統計，全世界至少有25種蚜蟲可以傳播BYDVs。而在中國，禾谷縊管蚜(R.padi)、麥長管蚜(S.avenae)、麥二叉蚜(S.graminum)和玉米蚜(R.maidis)是BYDVs的主要傳播介體。BYDVs在蚜蟲體內以循回型非增殖方式傳播。