[發(fā)明專利]一種TPBG抗體及其制備方法、其偶聯(lián)物和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611206936.5
• 申請(qǐng)日: 2016-12-23
• 公開（公告）號(hào): CN106916227B
• 公開（公告）日: 2019-12-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫曉嵐;張瑩;張瑜;胡飛飛;宮世勇;劉禮樂
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 凱惠科技發(fā)展(上海)有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/32
• 分類號(hào): C07K16/32;C12N15/13;G01N33/574;G01N33/569;A61K47/68;A61K45/00;A61K38/08;A61P35/00
• 代理公司: 31283 上海弼興律師事務(wù)所
• 代理人: 薛琦;朱水平

本發(fā)明公開了一種TPBG抗體及其制備方法、其偶聯(lián)物和應(yīng)用。所述TPBG抗體包括TPBG抗體的重鏈可變區(qū)重鏈CDR1、重鏈CDR2和重鏈CDR3中的一種或多種，和/或，TPBG抗體的輕鏈可變區(qū)輕鏈CDR1、輕鏈CDR2和輕鏈CDR3中的一種或多種，其氨基酸序列分別如本發(fā)明中所述。所述TPBG抗體是人源化抗體，具有高親和力，與小分子藥物毒素MMAF偶聯(lián)后制得的偶聯(lián)物能夠?qū)PBG陽性的細(xì)胞有細(xì)胞毒殺傷作用，因此運(yùn)用于治療腫瘤等藥物的制備中。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及抗體領(lǐng)域，具體涉及一種TPBG抗體及其制備方法、其偶聯(lián)物和應(yīng)用。

背景技術(shù)

在對(duì)胚胎干細(xì)胞滋養(yǎng)層和癌細(xì)胞進(jìn)行比較時(shí)發(fā)現(xiàn)一種細(xì)胞表面分子，滋養(yǎng)層特異性糖蛋白(TPBG，又稱為5T4)，是胚胎滋養(yǎng)層表達(dá)的特異性蛋白。人類TPBG蛋白的分子量約為72kDa，包含420個(gè)氨基酸，其N端低聚糖結(jié)構(gòu)具有多樣性，能夠防止蛋白質(zhì)水解，并且在細(xì)胞膜信號(hào)傳導(dǎo)過程中與其他分子有交互作用。TPBG蛋白共包含7個(gè)重復(fù)的亮氨酸結(jié)構(gòu)域(LRR)，可參與蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的相互作用。

滋養(yǎng)層是胎盤和胎兒之間的一層特殊的胚胎干細(xì)胞，TPBG廣泛表達(dá)于胚胎發(fā)育期的各種滋養(yǎng)層細(xì)胞。對(duì)于正常成人組織中，TPBG只在有限的幾種上皮細(xì)胞中有表達(dá)。但是，TPBG在很多癌細(xì)胞中表達(dá)，如子宮癌、結(jié)腸癌、胃癌、卵巢癌、口腔癌、前列腺癌、肺癌或腎癌組織中都檢測到TPBG的表達(dá)，在結(jié)腸癌、胃癌或卵巢癌中有證據(jù)表明TPBG的表達(dá)量與癌癥的低治愈率相關(guān)。而在非小細(xì)胞肺癌、腎癌或胰腺癌的組織中，TPBG的表達(dá)高達(dá)95％以上。

很多研究顯示，過表達(dá)該TPBG能夠促進(jìn)細(xì)胞遷移，同時(shí)還能夠避免免疫監(jiān)控。在小鼠纖維原細(xì)胞中過表達(dá)TPBG能夠誘導(dǎo)細(xì)胞呈現(xiàn)紡錘體形態(tài)，降低細(xì)胞粘附。在小鼠正常上皮細(xì)胞中，同樣發(fā)現(xiàn)TPBG能夠抑制上皮細(xì)胞鈣粘蛋白(E-cadherin)，促進(jìn)細(xì)胞遷移。而TPBG在細(xì)胞內(nèi)的部分有抑制細(xì)胞骨架形成的功能。同時(shí)，TPBG與上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)移(EMT)相關(guān)，TPBG作為胚胎干細(xì)胞發(fā)育的早期標(biāo)志物，增加細(xì)胞間質(zhì)蛋白酶的活性，干擾肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的排列，下調(diào)E-cadherin的表達(dá)。還有研究發(fā)現(xiàn)，TPBG與CXCR4共定位于細(xì)胞膜表明，能夠誘導(dǎo)其配體CXCL12趨化因子的結(jié)合，促進(jìn)炎癥和腫瘤的擴(kuò)散。在TPBG陰性細(xì)胞中，CXCL12結(jié)合另一個(gè)受體CXCR7，抑制趨化反應(yīng)，有利于細(xì)胞的生長和存活。Wnt/b-catenin信號(hào)通路對(duì)發(fā)育和細(xì)胞再生起到非常重要的作用，TPBG通過抑制LRP6與Wnt受體的內(nèi)吞，抑制Wnt信號(hào)通路，從而抑制細(xì)胞粘附和細(xì)胞骨架的形成，促進(jìn)腫瘤的遷移和擴(kuò)散。還有證據(jù)表明TPBG在乳腺癌和胃癌細(xì)胞中參與非經(jīng)典的Wnt通路，同樣促進(jìn)癌細(xì)胞的遷移和浸潤。

抗體藥物偶聯(lián)藥物，是由抗體與高效小分子藥物通過連接物偶聯(lián)形成的抗體藥物偶聯(lián)物，能夠使高毒性小分子藥物特異識(shí)別癌細(xì)胞上的靶點(diǎn)蛋白，從而特異性殺死癌細(xì)胞。近一百年間，基于抗體的免疫療法與基于化學(xué)藥物的化學(xué)療法，一直是臨床上癌癥治療的兩大治療策略。抗體以腫瘤細(xì)胞過度表達(dá)的抗原為靶點(diǎn)，多種治療性單抗已經(jīng)在臨床上取得了巨大成功。在臨床實(shí)踐中，治療性抗體雖然具有很好的靶向性，但是殺傷作用存在局限性。小分子化學(xué)藥物雖然具備對(duì)癌細(xì)胞的高效殺傷作用，但是對(duì)非癌細(xì)胞也造成同樣的傷害。因此臨床上抗體藥物以及小分子藥物各自的局限性，對(duì)藥物研發(fā)提出了新的要求。新一代抗體藥物偶聯(lián)物，利用抗體對(duì)靶細(xì)胞的特異結(jié)合能力，輸送高細(xì)胞毒的化學(xué)藥物，實(shí)現(xiàn)對(duì)癌細(xì)胞的靶向高效殺傷。隨著新型化學(xué)連接技術(shù)的出現(xiàn)，抗體藥物偶聯(lián)藥在八十年代末開始進(jìn)入臨床研究，目前已經(jīng)有2個(gè)ADC藥物經(jīng)FDA批準(zhǔn)上市。

ADC藥物的開發(fā)涉及：藥物靶點(diǎn)的篩選、重組抗體的制備、連接物技術(shù)開發(fā)以及高細(xì)胞毒性化合物的篩選優(yōu)化等幾個(gè)方面。TPBG作為癌細(xì)胞特異表達(dá)的蛋白，是ADC藥物的候選靶點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容