[發明專利]一種重組融合堿性磷酸酶-過敏原蛋白及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201611206397.5
• 申請日: 2016-12-23
• 公開（公告）號: CN108239651B
• 公開（公告）日: 2021-10-01
• 發明（設計）人: 孫寶清;羅文婷;李晨陽;李小鋒;李園枚;吳慧潔;鄭佩燕;黃惠敏;韋妮莉;黃金玲
• 申請（專利權）人: 廣州呼吸疾病研究所;廣州醫科大學附屬第一醫院;廣東和信健康科技有限公司;廣州銳達生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/85;C07K19/00;C12N9/16;C12N9/12;G01N33/68;G01N33/573
• 代理公司: 北京派特恩知識產權代理有限公司 11270
• 代理人: 陳萬青;張穎玲

1.一種重組融合堿性磷酸酶-過敏原蛋白的表達載體，所述表達載體由一種含表達所述堿性磷酸酶的序列和表達所述過敏原蛋白的DNA分子有功能地連接組成，其特征在于，

所述表達所述堿性磷酸酶的序列為pcmv-signal peptide-seap-linker-MCS-HA或pcmv-signal peptide-MCS-linker-seap-HA，所述linker為1-250個氨基酸。

2.根據權利要求1所述的表達載體，其特征在于，所述過敏原蛋白包括蝦原肌球蛋白、蟹原肌球蛋白、蟹精氨酸激酶、雞蛋卵類黏蛋白Gal d1、雞蛋卵清蛋白Gal d2、雞蛋卵轉鐵蛋白Gal d3、雞蛋溶菌酶Gal d4；牛奶β-乳球蛋白、牛奶α-乳白蛋白、牛奶酪蛋白；德國蟑螂Blag1～8、屋塵螨Derp1～2；粉塵螨Derf1～2；貓毛Feld1、狗毛Canf1或豚草中的致敏蛋白，或與所述過敏原蛋白共享抗體表位的變體或片段；所述過敏原的基因通過人工合成獲得。

3.根據權利要求1所述的表達載體，其特征在于，所述過敏原蛋白包括蝦原肌球蛋白、蟹原肌球蛋白、蟹精氨酸激酶、雞蛋卵類黏蛋白Gal d1、雞蛋卵清蛋白Gal d2、雞蛋卵轉鐵蛋白Gal d3、雞蛋溶菌酶Gal d4；牛奶β-乳球蛋白、牛奶α-乳白蛋白、牛奶酪蛋白；德國蟑螂Blag1～8、屋塵螨Derp1～2；粉塵螨Derf1～2；貓毛Feld1、狗毛Canf1或豚草中的致敏蛋白，或與所述過敏原蛋白共享抗體表位的變體或片段；所述過敏原的基因通過RT-PCR擴增獲得。

4.根據權利要求1所述的表達載體，其特征在于，所述表達載體為真核表達載體或原核表達載體。

5.根據權利要求1所述的表達載體，其特征在于，所述表達載體為昆蟲表達載體、酵母表達載體或植物表達載體。

6.一種重組融合堿性磷酸酶-過敏原蛋白的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將權利要求1-5之一所述的表達載體轉染宿主細胞進行表達；

(2)篩選并建立穩定細胞系；

(3)搖瓶發酵表達目的蛋白。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述宿主細胞為哺乳細胞、昆蟲表達系統、酵母表達系統或植物表達系統。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述哺乳細胞為CHO或HEK293。

9.權利要求6-8之一所述方法獲得的重組融合堿性磷酸酶-過敏原蛋白。

10.一種檢測過敏原特異性IgE抗體的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：已包被抗人IgE的酶標板、權利要求9所述重組融合堿性磷酸酶-過敏原蛋白、樣品稀釋液和底物顯色液；

所述樣品稀釋液為10mmol/L pH7.4-7.6的磷酸鹽緩沖液，所述磷酸鹽緩沖液中含質量百分比為1％的BSA和體積百分比為0.05％的Tween-20；

所述底物顯色液為堿性磷酸酶化學發光液或者BCIP/NBT。