[發明專利]具有肺癌靶向磁共振成像能力的納米造影劑及其制作方法

在審

• 申請號: 201611201300.1
• 申請日: 2016-12-22
• 公開（公告）號: CN106581697A
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發明（設計）人: 朱濤峰;馬鐵梁;陳如華;謝婧;羅一烽;葛志軍
• 申請（專利權）人: 宜興市人民醫院
• 主分類號: A61K49/18
• 分類號: A61K49/18;A61K49/10
• 代理公司: 長沙星耀專利事務所43205
• 代理人: 許伯嚴

技術領域

本發明屬于放射診斷學技術領域，具體涉及一種具有肺癌靶向磁共振成像能力的納米造影劑及其制作方法。

背景技術

肺癌是我國常見的惡性腫瘤之一，肺癌早期缺乏特征性的臨床表現，部分患者在疾病確診時已處于疾病的中晚期。因此建立一種更有效的系統來實現對肺癌的早期診斷顯得尤為重要。目前磁共振成像 (magnetic resonance imaging, MRI)的造影劑是超順磁性造影劑和水溶性順磁性造影劑。如超順磁性Fe₃O₄成像劑對T₂時間有著顯著的影響，而其主要缺點是在變暗的成像模式下，得到較為暗色的圖像，對靶標部位的器官、組織成像的對比度不大，且易與周圍組織的MRI效果相混淆而造成誤診。與之不同的是，一般順磁性造影劑主要影響T₁時間，即通過縮短縱向弛豫時間，使T₁加權像變亮，因此順磁性造影劑（T₁造影劑）一般都是正增強造影劑，容易將病灶部位與正常組織清晰的區分開，進而增強疾病診斷效果。目前已經許可上市和正在臨床實驗的超順磁性造影劑絕大多數由四氧化三鐵顆粒核心和外面包覆的一層高聚物組成，粒徑約為 25-40 納米，其合成工藝復雜、制造成本高、粒徑較大、結晶度低、MRI 成像效果差、表面包覆層的厚度不均。而目前所用的順磁性造影劑絕大多數是含有小分子釓的有機配合物，均為胞外試劑，在體內呈非特異性分布，適用于腦、腎和血液系統的成像，但對肝膽道等系統的成像效果差，這使得它們不能用作選擇性(靶向性)造影劑。

葉酸受體是一種可用于腫瘤標記的細胞表面蛋白，具有有用的抗腫瘤藥物傳遞靶位。因此葉酸常被連接在低分子量藥物分子或者高聚物鏈端，傳遞靶向結合的分子到惡性腫瘤表面，起到靶向性識別腫瘤的目的。葉酸受體在肺癌細胞中呈過度表達，因此肺癌可顯著提升對葉酸修飾過的納米顆粒的攝取能力。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足而提供一種具有肺癌靶向磁共振成像能力的納米造影劑及其制作方法，該具有肺癌靶向磁共振成像能力的納米造影劑將具有肺癌靶向識別能力的小分子葉酸錨固在不對稱金鎳（Au-Ni）納米顆粒表面，以實現其對肺癌細胞的靶向性成像。

本發明采用以下技術方案：

具有肺癌靶向磁共振成像能力的納米造影劑的制備方法，包括如下步驟：

步驟一：將一定量的乙酰丙酮鎳置于油胺和十八胺的混合溶劑中，加熱至待其完全溶解時，滴加相同摩爾量的HAuCl₄，升溫攪拌反應；反應結束后待體系降溫，加入氯仿，再邊攪拌邊加入適量十八胺，在反應容器外放置永磁鐵，收集不對稱Au-Ni納米顆粒，后用氯仿反復淋洗去除多余的納米金，最后收集得到純的較高的不對稱Au-Ni納米顆粒；

步驟二：將步驟一得到的不對稱Au-Ni納米顆粒冷凍干燥后備用，稱取冷凍干燥后的不對稱Au-Ni納米顆粒超聲分散于二甲基甲酰胺(DMF)和氯仿的混合溶液中，待完全分散后加入COOH-PEG-NH₂，震蕩；

步驟三：加入SH-PEG，超聲后震蕩；

步驟四：利用磁鐵收集反應產物，并分別用氯仿、乙醇和蒸餾水洗滌數次，將得到的兩端分別經過修飾的不對稱Au-Ni納米顆粒分散于DMSO溶液中；

步驟五：將葉酸(FA) 分散在DMSO 中，然后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和N-羥基丁二酰亞胺(NHS)，攪拌反應；

步驟六：將步驟四和步驟五所得反應液合并，超聲反應結束后，離心收集沉淀，并用DMSO、乙醇和蒸餾水防護洗滌數次，即得到具有肺癌靶向磁共振成像能力的納米造影劑PEG-SH@Au-Ni@COOH-PEG-FA，將其分散于PBS緩沖液中待用。

更進一步地，步驟一中所述油胺和十八胺的質量比為1:2，油胺和十八胺的混合溶液與加入的乙酰丙酮鎳和HAuCl₄總量的質量比為100:0.6。

更進一步地，步驟一中所述升溫時的升溫速率為5℃/min，升溫攪拌反應具體為：升溫至200-210℃，攪拌反應1-1.5 h。

更進一步地，步驟二中所述二甲基甲酰胺和氯仿的混合溶液與不對稱Au-Ni納米顆粒的質量比為100:0.02，所述不對稱Au-Ni納米顆粒與COOH-PEG-NH₂的質量比為5:1，所述二甲基甲酰胺和氯仿的質量比為1:1，所述震蕩具體為于震蕩器上震蕩3-5 h。