[發明專利]磁性碳材料表面菠蘿蛋白酶分子印跡聚合物的制備方法

有效

• 申請號: 201611200968.4
• 申請日: 2016-12-22
• 公開（公告）號: CN106633056B
• 公開（公告）日: 2018-11-09
• 發明（設計）人: 傅強;徐欣雅;劉瑞林;郭鵬琦;周玉蘭;曾愛國;常春
• 申請（專利權）人: 西安交通大學
• 主分類號: C08G73/06
• 分類號: C08G73/06;C08K3/04;C08J9/26
• 代理公司: 西安智大知識產權代理事務所 61215
• 代理人: 賀建斌

一種磁性碳材料表面菠蘿蛋白酶分子印跡聚合物的制備方法，先將石榴皮粉末加入草酸鐵銨水溶液中，浸泡，干燥后通入氮氣，碳化，將得到的黑色固體粉碎，用蒸餾水和無水乙醇洗滌得到石榴皮磁性碳材料；取石榴皮磁性碳材料加入Tris緩沖液中，再加入模板分子菠蘿蛋白酶，室溫攪拌進行預聚合，然后加入功能單體多巴胺反應，磁力攪拌，將得到的聚合物離心、干燥，用洗脫劑除去模板分子菠蘿蛋白酶，之后用蒸餾水洗滌至中性，干燥得到菠蘿蛋白酶分子印跡聚合物，本發明制備過程簡單、成本低廉，得到的印跡聚合物具有特異性強、分離效率高、可重復利用和吸附平衡時間短等特點，極大了提高了對菠蘿蛋白酶的吸附容量。

技術領域

本發明屬于表面分子印跡聚合物技術領域，具體涉及一種磁性碳材料表面菠蘿蛋白酶分子印跡聚合物的制備方法。

背景技術

菠蘿蛋白酶(bromelain,BR)是從鳳梨屬植物菠蘿中提取的半胱氨酸巰基蛋白水解酶，也稱鳳梨酶或鳳梨酵素。因其可以將蛋白質、酰胺、肽和脂等分解成小分子結構的物質，常常被當做食品的添加劑，廣泛的應用于肉質的嫩化、啤酒和白酒的澄清、干酪生產和水解蛋白等方面。此外，菠蘿蛋白酶在醫藥方面具有極高的藥物價值和治療價值。研究表明菠蘿蛋白酶具有消炎、抗腫瘤、抑制血小板聚集、溶解纖維蛋白、調節細胞因子和免疫、及皮膚清創的特性，也具有促進藥物的吸收、促進傷口愈合和改善心血管循環系統的作用。目前，商業化分離純化菠蘿蛋白酶的方法主要有：高嶺土吸附法、沉淀法、膜分離法以及單寧沉淀法和超濾濃縮法等。但這些分離方法普遍存在生產工藝繁雜，提取效率低，選擇性差，對環境有污染等問題。因此，需要一種特異性強、分離效率高、穩定性好的從復雜基質中提取菠蘿蛋白酶的分離分析方法。

分子印跡技術(molecularly imprinting technique,MIT)是一種合成對特定模板分子具有專一識別能力的分子印跡聚合物的新型技術。由于其具有結構預定性、識別特異性、性質穩定性和廣泛適用性的特點，已成功的應用于分離分析、仿生催化、藥物釋放、生物傳感器等領域。目前，小分子的印跡聚合物技術已趨于成熟，但對于水溶性蛋白質的分子印跡聚合物的制備，由于蛋白質存在體積龐大、結構復雜、可結合位點多、容易變性失活等特點，常規的合成印跡聚合物的方法對其印跡比較困難，適用性較差。

發明內容

為了克服上述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種磁性碳材料表面菠蘿蛋白酶分子印跡聚合物的制備方法，具有簡單方便、分離效率高、特異性強和可重復利用的優點。

為了達到上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種磁性碳材料表面菠蘿蛋白酶分子印跡聚合物的制備方法，包括以下步驟：

1)將石榴皮粉末加入草酸鐵銨水溶液中得到質量濃度為350.0mg/mL混合液，80℃浸泡3d，在100℃下干燥后通入氮氣，650℃碳化3h，將得到的黑色固體粉碎，用蒸餾水和無水乙醇洗滌得到石榴皮磁性碳材料；

2)取石榴皮磁性碳材料加入Tris緩沖液中得到其質量濃度為2.0～8.0mg/mL的混合液，再加入模板分子菠蘿蛋白酶使其質量濃度在1.0～2.0mg/mL之間，室溫攪拌2h進行預聚合，然后加入功能單體多巴胺使其質量濃度在2.0～10.0g/L之間，反應溫度為25～40℃，磁力攪拌6～24h，將得到的聚合物離心、干燥，用洗脫劑除去模板分子菠蘿蛋白酶，之后用蒸餾水洗滌至中性，60℃干燥得到菠蘿蛋白酶分子印跡聚合物。

所述的步驟1)中草酸鐵銨水溶液濃度為0.8M。

所述的步驟2)中Tris緩沖液pH值為8.0～8.6。

所述的步驟2)中洗脫劑為2％十二烷基磺酸鈉-2％冰醋酸混合溶液或2％氯化鈉-2％冰醋酸混合溶液。

本發明的優點在于：