[發(fā)明專利]一種陽離子膜化修飾劑及其防脫玻片的制備方法

在審

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• 申請日: 2016-12-22
• 公開（公告）號: CN106630671A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王瑞輝;張勇;王洪英
• 申請（專利權(quán)）人: 王瑞輝
• 主分類號: C03C17/28
• 分類號: C03C17/28;G01N1/31;C08G69/10
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及是一種醫(yī)學(xué)臨床檢驗時的細(xì)胞承載體的細(xì)胞玻片，具體為一種陽離子膜化修飾劑及其防脫玻片的制備方法。

背景技術(shù)

防脫玻片又叫離子修飾玻片和細(xì)胞捕獲玻片等，是用化學(xué)或物理方法對載玻片或蓋玻片的表面進(jìn)行修飾，以防止操作過程中細(xì)胞或組織掉片現(xiàn)象的發(fā)生。防脫玻片應(yīng)用非常廣泛：如病理學(xué)組織切片、脫落細(xì)胞制片，以及細(xì)胞培養(yǎng)、特別是宮頸刮片過程中的液基細(xì)胞薄層制片等。防脫玻片的使用品種也繁多：如陽離子防脫玻片、陰離子防脫玻片、醛化防脫玻片以及硅化防脫玻片等硅玻璃表面處理產(chǎn)品等。防脫玻片表面的處理方法也有多種：如物理方法的超聲波，化學(xué)方法的洗潔劑或化學(xué)修飾劑，或者物理方法和化學(xué)方法聯(lián)用。其中，使用的化學(xué)修飾劑(粘合劑)也有不同，如：多聚左旋賴氨酸(Poly-L-lysine)、硅烷處理劑(3-氨丙基-乙氧基甲硅烷)。

在生物及病理組織學(xué)切片制備，如石蠟切片、冰凍切片或細(xì)胞涂片及常規(guī)染色中，組織掉片或脫片現(xiàn)象較普遍存在，特別在實驗步驟較多的免疫組織化學(xué)及原位雜交時尤其嚴(yán)重，對臨床病理診斷工作造成困難，延誤診斷時間，甚至導(dǎo)致漏診、誤診等不利影響，因多聚-L-賴氨酸防脫片劑是水溶性溶液，故載玻片上雜質(zhì)油脂不去除干凈會成為載玻片表面與多聚-L-賴氨酸防脫片劑間的接觸障礙，這樣很難保證后續(xù)玻片涂膠質(zhì)量。

免疫組織化學(xué)染色過程中，因步驟多、微波高溫修復(fù)、37℃孵育等因素，常出現(xiàn)脫片問題，造成染色的失敗，浪費(fèi)人工及試劑，同時在一般的制作過程中，常會剩余很多試劑而浪費(fèi)。

發(fā)明內(nèi)容

針對以上問題，本發(fā)明提供了一種陽離子膜化修飾劑及其防脫玻片的制備方法，采用了載玻片、多聚-L-賴氨酸、載玻片的疊加制備方法，能使防脫片劑在載玻片有效貼片表面形成一種較長時間的潴留，有利于防脫片劑與干凈載玻片有效貼片表面的緊密接觸和延長其互相作用的時間，與經(jīng)典浸泡式涂膠法相比，不但操作方法簡便易學(xué)，而且既有效保證了涂膠質(zhì)量又節(jié)約了試劑，達(dá)到了市售防脫片載玻片的優(yōu)良效果，可以有效解決背景技術(shù)中的問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種陽離子膜化修飾劑，按重量份數(shù)計包括以下成分：

優(yōu)選的，按重量份數(shù)計包括以下成分：

優(yōu)選的，該陽離子膜化修飾劑的制備方法為：首先稱取L-賴氨酸，適量蒸餾水加熱使之溶解，然后加入硫酸銅，回流2h，然后冰浴條件下，分批加入氯甲酸芐酯，在此過程中，通過加入碳酸氫鈉保證溶液的pH在8～9之間，攪拌過濾，沉淀，用蒸餾水、乙醇洗滌，干燥后得到藍(lán)色的N-芐氧羰基-L-賴氨酸銅鹽絡(luò)合物，將其溶于二惡烷和氯仿的混合溶劑中，通入無水氯化氫一段時間后，通入無水溴化氫，溶液產(chǎn)生沉淀.氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫攪拌2h，將反應(yīng)好的溶液倒入冰乙醚中萃取，水相用鹽酸調(diào)pH到3左右，然后用透析袋純化24h，后進(jìn)行冷凍干燥，得到白色的陽離子膜化修飾劑多聚-L-賴氨酸。

本發(fā)明還提供了一種利用上述陽離子膜化修飾劑制備防脫玻片的方法，包括以下步驟：

(1)將清潔液溶于自來水中，然后把載玻片浸泡一夜，自來水沖洗4小時，最后放入95％的酒精中浸泡1h，取出干燥；

(2)取陽離子膜化修飾劑0.4ml，蒸餾水3.6ml，放入培養(yǎng)皿中混勻，配成1∶9的溶液；

(3)取潔凈的載玻片，磨砂面端向上，另一端放入多聚賴氨酸溶液中，傾靠在器皿壁上，然后疊加放入5-10張，上述步驟(2)制得的溶液緩慢在載玻片間滲透，此時，溶液在兩玻片之間均勻分布，無氣泡和空隙；

(4)于40℃烤箱內(nèi)烘干后，分開玻片，得到若干所述防脫玻片。

優(yōu)選的，所述清潔液的組成為：重鉻酸鉀120g、濃硫酸200ml、蒸餾水1000ml。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明采用了載玻片、多聚-L-賴氨酸、載玻片的疊加制備方法，能使防脫片劑在載玻片有效貼片表面形成一種較長時間的潴留，有利于防脫片劑與干凈載玻片有效貼片表面的緊密接觸和延長其互相作用的時間，與經(jīng)典浸泡式涂膠法相比，不但操作方法簡便易學(xué)，而且既有效保證了涂膠質(zhì)量又節(jié)約了試劑，達(dá)到了市售防脫片載玻片的優(yōu)良效果。

具體實施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實施例，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。