[發(fā)明專利]一種核苷酸基金屬仿生漆酶

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611197305.1
• 申請日: 2016-12-22
• 公開（公告）號: CN106866762B
• 公開（公告）日: 2019-10-18
• 發(fā)明（設計）人: 梁浩;林菲菲;袁其朋;張育眉;張斯琪
• 申請（專利權）人: 北京化工大學
• 主分類號: C07H19/20
• 分類號: C07H19/20;G01N21/33
• 代理公司: 無錫市朗高知識產(chǎn)權代理有限公司 32262
• 代理人: 趙華

本發(fā)明涉及一種核苷酸基金屬仿生漆酶，具體涉及一種用于酚類物質和腎上腺素類化合物檢測的核苷酸基金屬仿生漆酶，該金屬仿生漆酶為Cu²⁺與核苷酸形成的納米網(wǎng)狀配位復合物，該復合物以Cu²⁺為催化中心，以核苷酸為有機骨架，具有類漆酶活性。該金屬仿生漆酶具有較高活性，能夠多次重復利用，并且穩(wěn)定性大大優(yōu)于生物漆酶，能夠代替生物漆酶應用于酚胺類物質的檢測。該金屬仿生酶還能夠直接催化氧化腎上腺素類化合物生成顯色物質，從而實現(xiàn)對腎上腺素類化合物的檢測。應用該金屬仿生漆酶檢測酚胺類物質及腎上腺素類化合物的方法簡便易行且靈敏度較高，在生化檢測領域具有較好的應用前景。

技術領域

本發(fā)明涉及一種核苷酸基金屬仿生漆酶，具體涉及一種用于酚類物質和腎上腺素類化合物檢測的核苷酸基金屬仿生漆酶。

背景技術

漆酶(苯二酚氧化酶，EC 1.10.3.2)是一類含銅多酚氧化酶，可催化氧化多種酚類和非酚類的底物，如苯酚、氯酚、鄰苯二胺等。漆酶作為一種綠色、環(huán)保生物催化劑，催化氧化的底物十分廣泛，在廢水處理、生物漂白、芳香化合物轉化、生物傳感器構建等方面領域有廣泛的應用前景。但是，天然漆酶不僅價格昂貴，穩(wěn)定性差，活性在使用過程中易受環(huán)境條件變化影響，另外酶無法回收進行重復使用，從而限制了天然漆酶在實際生活中的應用。因此，需要一種具有高穩(wěn)定性和可循環(huán)利用的模擬酶來克服天然酶在應用過程中的諸多問題。

隨著工業(yè)的發(fā)展，在改善人類生活的同時，也對環(huán)境帶來巨大的的危害。環(huán)境中的酚污染主要指酚類化合物對水體的污染，酚類化合物是指苯及其稠環(huán)的羥基衍生物。含酚廢水是當今世界上危害大、污染范圍廣的工業(yè)廢水之一，是環(huán)境中水污染的重要來源。目前，我國測定工業(yè)廢水中揮發(fā)酚的標準方法是以K₃(Fe(CN)₆)作氧化劑，4-氨基安替吡啉作顯色劑的紫外分光光度法，但是該法所生成的絡合物在水溶液中很不穩(wěn)定，而且氧化劑對人體有毒害，因此需要一種新的氧化劑取代K₃(Fe(CN)₆)作氧化劑，應用于水體的酚類物質檢測。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種核苷酸基金屬仿生漆酶，以解決上述問題。

本發(fā)明的實施例提供了一種核苷酸基金屬仿生漆酶，為Cu²⁺與核苷酸形成的納米網(wǎng)狀配位復合物，復合物以Cu²⁺為催化中心，以核苷酸為有機骨架，具有類漆酶活性。

進一步，該核苷酸基金屬仿生漆酶用于檢測酚類化合物，酚類化合物包括苯酚、鄰苯二酚、對苯二酚、萘酚和2,4-二氯苯酚。

進一步，檢測酚類化合物的方法包括:將核苷酸基金屬仿生漆酶與顯色劑4-氨基安替吡啉和酚類化合物的混合溶液反應30-120min，溶液反應后離心，上清液在510nm下測定吸光度。

進一步，核苷酸基金屬仿生漆酶的濃度為0.025-0.5mg/ml,混合溶液中酚類化合物的濃度為0.005-0.1mg/mL，混合溶液中顯色劑4-氨基安替吡啉的濃度為0.1-0.5mg/mL，混合溶液的pH為2-10，混合溶液的鹽濃度為0-1000mmol/L。

進一步，該鹽包括NaCl,KCl,CaCl₂,MgCl₂。

進一步，該核苷酸基金屬仿生漆酶還用于檢測腎上腺素類化合物，腎上腺素類化合物包括腎上腺素和去甲腎上腺素。

進一步，檢測腎上腺素類化合物的方法包括:將核苷酸基金屬仿生漆酶與腎上腺素類化合物和緩沖液混合反應15-120min，溶液反應后離心，在485nm下測定上清液的吸光度。

進一步，核苷酸基金屬仿生漆酶的濃度為0.025-0.5mg/ml,腎上腺素類化合物的濃度為0.005-0.1mg/mL，緩沖液為MES緩沖液，緩沖液的濃度為30-100mmol/L，緩沖液的pH為6.8-7.4。