[發(fā)明專利]miRNA-155及其抑制劑在DC-CIK細胞培養(yǎng)方面的應用

有效

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• 申請日: 2016-12-22
• 公開（公告）號: CN106754699B
• 公開（公告）日: 2020-01-31
• 發(fā)明（設計）人: 不公告發(fā)明人
• 申請（專利權）人: 朗姿賽爾生物科技(廣州)有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 11357 北京同輝知識產權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 饒富春

本發(fā)明公開了miRNA?155及其抑制劑在DC?CIK細胞培養(yǎng)方面的應用，miRNA?155可以作為藥物靶標在提高DC細胞共培養(yǎng)增強的CIK細胞對腫瘤細胞的殺傷力中的應用。申請人研究發(fā)現，miRNA?155下調表達的DC?CIK細胞比miRNA?155正常表達的DC?CIK細胞具有更高的殺傷力，而miRNA?155下調表達的DC細胞與miRNA?155正常表達的DC細胞的殺傷力基本一致，無顯著性差異。這表明，miRNA?155下調并不能直接提高DC細胞對白血病細胞的殺傷力，但是miRNA?155下調的DC細胞可以通過共培養(yǎng)顯著增強CIK細胞對腫瘤細胞的殺傷力。申請人還發(fā)現，太子參環(huán)肽B和太子參環(huán)肽C為miRNA?155的有效抑制劑。

技術領域

本發(fā)明屬于免疫領域，涉及DC-CIK細胞的培養(yǎng)，具體涉及miRNA-155及其抑制劑在DC-CIK細胞培養(yǎng)方面的應用。

背景技術

生物免疫療法是通過從體外補充、誘導或活化機體內本來固有的生物應答調節(jié)系統，活化和調動具有細胞毒活性的生物活性細胞和細胞因子，以調整各種免疫殺傷性的生物反應。目前在免疫治療方面研究應用較多的有淋巴因子激活的殺傷細胞、腫瘤浸潤淋巴細胞、細胞因子誘導的殺傷(CIK)細胞、樹突狀細胞(DC)、共培養(yǎng)免疫(DC-CIK)細胞、自然殺傷細胞型的淋巴細胞，其中DC和CIK細胞是腫瘤免疫治療的兩個重要部分，它們之間的相互作用所誘發(fā)的免疫應答是免疫抑瘤效應的中心環(huán)節(jié)[王志華等，CIK細胞治療癌癥：國際臨床試驗的現狀及展望，中國腫瘤生物治療雜志，2013，20(2):129-137]。

DC首先在小鼠脾臟中發(fā)現，因其成熟時細胞表面伸出膜狀或刺狀突起而得名。DC的前體細胞為CD34+或CD14+細胞，存在于人骨髓、臍血中的CD34+或CD14+細胞，體外添加粒細胞-單核細胞集落刺激因子和腫瘤壞死因子α的培養(yǎng)條件下可發(fā)育成DC，DC主要分為髓系DC和淋巴系DC，髓系DC包括CD34+干細胞來源的DC、單核細胞衍生的DC等。DC是目前發(fā)現的功能最強的抗原呈遞細胞，表面具有豐富的有助于抗原呈遞的分子，如主要組織相容性復合體Ⅰ、Ⅱ，共刺激分子B7-1、B7-2，細胞黏附分子1、3以及淋巴細胞功能相關抗原1、3等，能有效激活初始T細胞，引發(fā)機體長生抗腫瘤免疫反應。

CIK是將人外周血單核細胞在體外用多種細胞因子共同培養(yǎng)一段時間后獲得的一群對腫瘤細胞有高度殺傷能力且具有不同細胞表型的異質細胞。其中CD3+CD56+細胞是CIK細胞群體中的主要效應細胞，被稱為自然殺傷細胞型淋巴細胞，兼有T淋巴細胞強大的抗瘤活性和自然殺傷細胞的非主要組織相容性復合體限制性殺瘤優(yōu)點。因此，CIK細胞對多種不同組織來源的腫瘤細胞均有殺傷作用。體外試驗結果表明，患者自身來源的CIK抗腫瘤活性明顯強于自體淋巴細胞激活的殺傷細胞，動物體內實驗結果也表明CIK對BALB/c裸鼠負荷的BEL-7402肝癌生長的平均抑制率明顯高于殺傷細胞。

雖然目前大量研究顯示DC、DC瘤苗、CIK細胞有顯著的抗腫瘤作用，但是臨床應用發(fā)現單獨應用DC、CIK細胞治療腫瘤效果并不是很理想，腫瘤細胞對這些免疫效應細胞發(fā)生抵抗導致過繼免疫療效不佳。DC和CIK是腫瘤免疫治療的兩部分，DC識別病原，激活獲得性免疫系統，而CIK通過發(fā)揮自身細胞毒性與分泌細胞因子殺傷腫瘤細胞。因此，設想可將CIK細胞和DC聯合起來治療惡性腫瘤，從而發(fā)揮協同抗腫瘤作用。實驗研究還證實，DC-CIK共培養(yǎng)后其抗腫瘤活性明顯高于單純CIK。

發(fā)明內容

本發(fā)明首先提供miRNA-155作為藥物靶標在提高DC細胞共培養(yǎng)增強的CIK細胞對腫瘤細胞的殺傷力中的應用；其次提供miRNA-155抑制劑或含有該抑制劑的試劑或試劑盒在提高DC細胞共培養(yǎng)增強的CIK細胞對腫瘤細胞的殺傷力中的應用，并提供太子參環(huán)肽B和太子參環(huán)肽C作為有效miRNA-155抑制劑。

本發(fā)明通過如下技術方案得以實現：

miRNA-155作為藥物靶標在提高DC細胞共培養(yǎng)增強的CIK細胞對腫瘤細胞的殺傷力中的應用。