[發(fā)明專利]一種阿苯達(dá)唑及其代謝物的檢測方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611193712.5
• 申請日: 2016-12-21
• 公開（公告）號: CN106770765B
• 公開（公告）日: 2019-10-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉剛;韓肖;周凱;陳雷
• 申請（專利權(quán)）人: 濰坊海潤華辰檢測技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京天奇智新知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11340
• 代理人: 陳永寧

本發(fā)明公開了一種檢測阿苯達(dá)唑及其代謝物的檢測方法，屬于藥物檢測技術(shù)領(lǐng)域。所述阿苯達(dá)唑及其代謝物的檢測方法是利用2，6?二叔丁基對甲酚和NaOH提取樣品中的阿苯達(dá)唑及其代謝物，之后使用高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測；所述2，6?二叔丁基對甲酚的濃度為1％；所述NaOH溶液的濃度為50％。本發(fā)明的有益效果是：本方法不僅僅適用于動物肌肉，還適用于肝臟等復(fù)雜基質(zhì)的檢測，本發(fā)明所使用的試劑毒性小，成本低，節(jié)約時間，還能有效地減少對雜質(zhì)的提取，簡化凈化步驟；采用高效液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行檢測，相比于單一的高效液相色譜，具有靈敏度高，重復(fù)性好，檢測限低的優(yōu)勢。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥物檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種阿苯達(dá)唑及其代謝物的檢測方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

目前，檢測阿苯達(dá)唑的方法中使用乙醚、乙腈等毒性大的溶劑，或者直接使用乙腈提取，這些方法不僅使樣品提取不充分，而且目標(biāo)化合物在提取過程中極易遭到破壞，從而影響定量結(jié)果。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

一種阿苯達(dá)唑及其代謝物的檢測方法，利用2，6-二叔丁基對甲酚和NaOH提取樣品中的阿苯達(dá)唑及其代謝物，之后使用高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測；所述2，6-二叔丁基對甲酚的濃度為1％；所述NaOH溶液的濃度為50％。

在上述方案的基礎(chǔ)上，所述阿苯達(dá)唑及其代謝物的檢測方法步驟如下：

1)提取純化

稱取樣品5.00g，加入5mL水、150μL 50％NaOH溶液和1mL 1％2，6-二叔丁基對甲酚，渦旋混合，再加入20mL乙酸乙酯，振蕩1min超聲提取20min，4000r/min離心5min，取上清液，向殘渣中加入10mL乙酸乙酯重復(fù)提取一次，合并兩次上清液于梨形瓶中，40℃旋蒸至干；向旋干后的梨形瓶中加入6mL乙腈飽和正己烷，振蕩混勻，倒入離心管中，再向梨形瓶中加入2mL乙腈，渦旋超聲1min后一并倒入離心管中，向離心管中加入6mL 0.1mol/L的鹽酸溶液，渦旋2min，4000r/min離心5min，除去正己烷層，備用；若乳化，超聲并用吸管攪拌后離心；

2)凈化柱凈化

用5mL甲醇和5mL水平衡活化PCX固相萃取柱后，取提取液過PCX凈化柱，分別用3mL水和3mL甲醇淋洗，然后用15mL體積濃度為5％氨水甲醇溶液洗脫，接收的洗脫液于40℃旋蒸至干后；分別加入1mL甲醇和1mL水，渦旋，過0.22μm尼龍濾膜，待測；

3)高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測

質(zhì)譜參數(shù)：離子源AJS ESI源；Gas Temp：325℃；Gas Flow：10L/min；Sheath GasTemp350℃；Sheath Gas flow：11L/min；

液相參數(shù)：A為0.1％甲酸水溶液，B為甲醇。

在上述方案的基礎(chǔ)上，所述阿苯達(dá)唑及其代謝物的檢測方法應(yīng)用于檢測動物源性食品中的阿苯達(dá)唑及其代謝物。

在上述方案的基礎(chǔ)上，所述動物源性食品為肌肉、蛋類、乳類、肝臟和腎臟。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明方法中用2，6-二叔丁基對甲酚和NaOH提取阿苯達(dá)唑及其代謝物，毒性較小；此外，阿苯達(dá)唑及其代謝物在水溶液中呈堿性，加入質(zhì)量濃度為50％NaOH水溶液可使阿苯達(dá)唑及其代謝物成分子狀態(tài)，利于有機(jī)試劑提取；加入質(zhì)量濃度為1％2，6-二叔丁基對甲酚可以保護(hù)阿苯達(dá)唑不被氧化；乙酸乙酯為弱極性的有機(jī)試劑，其加入有利于阿苯達(dá)唑的提取且雜質(zhì)提取的少；乙腈飽和正己烷用來去除樣品中的油脂類雜質(zhì)，加入鹽酸可使阿苯達(dá)唑成離子狀態(tài)有利于PCX凈化柱凈化；5％氨水甲醇呈強(qiáng)堿性，洗脫時可將PCX凈化柱吸附的阿苯達(dá)唑置換下來。