[發明專利]細胞分離器具表面處理方法、相關器具、外周血稀有細胞或循環腫瘤細胞快速高效分離方法

有效

• 申請號: 201611192144.7
• 申請日: 2016-12-21
• 公開（公告）號: CN108220233B
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發明（設計）人: 白艷軍;陶晟;王珊
• 申請（專利權）人: 上海透景診斷科技有限公司
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078;C12N5/09;C12M1/42
• 代理公司: 上海唯源專利代理有限公司 31229
• 代理人: 曾耀先

本發明提供一種外周血稀有細胞快速高效分離方法，包括：(1)分離外周血中的白細胞，用細胞稀釋液重懸浮白細胞得到白細胞溶液；(2)將磁球?白細胞表面生物標志物抗體與白細胞溶液混合孵育獲得孵育溶液；(3)將內壁采用纖維蛋白原封閉的環形管路的一部分置于磁場中，采用細胞稀釋液稀釋孵育溶液獲得孵育稀釋液，使孵育稀釋液在環形管路中循環流動，通過磁場吸附孵育稀釋液中的磁球，收集環形管路中的液體組分。還提供外周血循環腫瘤細胞快速高效分離方法、細胞分離器具表面處理方法和相關器具。本發明的外周血稀有細胞或循環腫瘤細胞分離方法能夠快速高效地分離外周血稀有細胞或循環腫瘤細胞，設計巧妙，操作簡便，適于大規模推廣應用。

技術領域

本發明涉及細胞分離技術領域，特別涉及外周血稀有細胞或循環腫瘤細胞分離技術領域，具體是指一種細胞分離器具表面處理方法、相關器具、外周血稀有細胞或循環腫瘤細胞快速高效分離方法。

背景技術

外周血中的循環腫瘤細胞檢測作為一種腫瘤液態活檢重要內容具有極大的臨床診斷價值。外周血中循環腫瘤細胞的檢測面臨的主要難點包括：1、循環腫瘤細胞數量極少，在7.5ml的血液樣本中僅有數個到數十個；2、樣本中比例極低，數個或數十個的細胞分布在5-7千萬的正常細胞中；3、缺乏明確的循環腫瘤細胞的細胞表面標志物，目前較為廣泛使用的循環腫瘤細胞的細胞表面標志分子為EpCAM，但越來越多的研究表明有相當數量的循環腫瘤細胞低表達或不表達該分子；4、缺乏明確的區別于正常細胞的物理特性。一些方法依據細胞密度或細胞大小進行循環腫瘤細胞的富集分離，這些方法都存在處理繁雜耗時、缺乏特性的缺陷。

目前的研究方向趨向于采用負向富集的方法，即將外周血樣本中正常的細胞去除，得到外周血稀有細胞，其中最大限度地保留循環腫瘤細胞。外周血中正常細胞都表達CD45細胞表面分子，因此目前廣泛采用的方法是采用表面包被特異性CD45抗體的磁球對正常細胞進行修飾，然后在磁場的作用下進行快速分離。但運用該方法往往不能得到預期的分離效果，原因包括：1、處理細胞過程中器具的與細胞接觸的表面會非特異性吸附細胞，造成目標細胞10％-60％的損失，在運用一般的表面處理比如一定濃度的血清進行處理后，并不能有效改善；2、在加磁場進行分離時，由于磁場的作用距離較短，所以一般磁球對細胞的修飾會在一個較小的反應體系中進行，一般為小于1-5ml，這就造成樣本中細胞的密度過大，達到1千萬-7千萬每ml，在加磁場分離的過程中，磁球修飾的細胞會大量攜帶非磁球修飾的細胞一起分離，導致目的細胞大量丟失。

一些采用微流體芯片的方法通過微流體的特性，將細胞的流動路徑進行擾動，以增強細胞表面和流動管道內壁修飾的抗體接觸，從而提高目標細胞的捕獲效率；另一種微流體芯片采用微流體的特性或聲波作用于流體的特性，將流體中不同粒徑大小的細胞進行分層分離；無論哪種微流體芯片，其處理樣品時采用的微流體處理樣本的速度較慢，一般處理1ml的樣本在2-3個小時以上。

因此，需要提供一種外周血稀有細胞或循環腫瘤細胞快速高效分離方法，其能夠快速高效地分離外周血稀有細胞或循環腫瘤細胞。

發明內容

為了克服上述現有技術中的缺點，本發明的一個目的在于提供一種外周血稀有細胞快速高效分離方法，其能夠快速高效地分離外周血稀有細胞，適于大規模推廣應用。

本發明的另一目的在于提供一種外周血稀有細胞快速高效分離方法，其設計巧妙，操作簡便，適于大規模推廣應用。

本發明的另一目的在于提供一種外周血循環腫瘤細胞快速高效分離方法，其能夠快速高效地分離外周血循環腫瘤細胞，適于大規模推廣應用。

本發明的另一目的在于提供一種外周血循環腫瘤細胞快速高效分離方法，其設計巧妙，操作簡便，適于大規模推廣應用。

本發明的另一目的在于提供一種細胞分離器具表面處理方法，采用該方法進行表面處理的細胞分離器具可以有效減少細胞操作過程中對細胞的非特異性吸附，從而可以減少目標細胞的損失，提高目標細胞的富集分離效率，適于大規模推廣應用。