[發(fā)明專利]一種基于細胞層面進行全蛋白質(zhì)組學分析的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611190958.7
• 申請日: 2016-12-21
• 公開（公告）號: CN108226317B
• 公開（公告）日: 2020-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陸豪杰;熊云;張瑩
• 申請（專利權(quán)）人: 復旦大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N27/62
• 代理公司: 上海元一成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.一種直接在細胞層面進行蛋白酶解的細胞全蛋白質(zhì)組學分析方法，其特征在于，當細胞溶液被加入到含真空干燥的凝膠顆粒的離心管中，溶液中的細胞通過吸脹的方式進入凝膠顆粒中，嵌入在凝膠顆粒中的細胞蛋白直接被胰酶酶解成肽段，而后送入質(zhì)譜進行檢測；其包括步驟：

（1）制備聚丙烯酰胺凝膠；

（2）收集細胞樣品，用PBS緩沖液洗2次；

（3）將細胞溶液與真空干燥的凝膠顆粒混合，冰浴靜置；

（4）對樣品進行冷熱交替處理2次后，用50%乙腈和100%乙腈各洗2次；

（5）對樣品進行DTT還原和IAA烷基化處理；

（6）對樣品進行胰酶酶解；

（7）提取酶解肽段用于后續(xù)LC-MS/MS分析。

2.按權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，（3）中所述細胞溶液所用的緩沖液為：含蛋白酶抑制劑的25 mM的碳酸氫銨水溶液。

3.按權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，（1）中的聚丙烯酰胺凝膠體積為50微升，所需的試劑包括：30微升25 mM的碳酸氫銨溶液，16.7微升含30%丙烯酰胺/雙丙烯酰胺的水溶液，其中丙烯酰胺與雙丙烯酰胺的質(zhì)量比為29:1，2.5微升濃度為1%的過硫酸銨，0.05微升四甲基乙二胺。

4.按權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，（1）中所制備凝膠切割至大約1 mm³大小的均勻顆粒，然后進行真空干燥。

5.按權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，（3）中冰浴靜置時間為5~10分鐘。