[發明專利]用于鑒定三種藥用蛇的引物組合及其應用

有效

• 申請號: 201611190219.8
• 申請日: 2016-12-20
• 公開（公告）號: CN106636397B
• 公開（公告）日: 2019-12-20
• 發明（設計）人: 袁媛;蔣超;黃璐琦;趙玉洋
• 申請（專利權）人: 中國中醫科學院中藥研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 11245 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關暢;何葉喧

1.引物組合，由引物對Ⅰ、引物對Ⅱ和引物對Ⅲ組成；

所述引物對Ⅰ由引物F1和引物F2組成；

所述引物F1為序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；

所述引物F2為序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；

所述引物對Ⅱ由引物F3和引物F4組成；

所述引物F3為序列表的序列3所示的單鏈DNA分子；

所述引物F4為序列表的序列4所示的單鏈DNA分子；

所述引物對Ⅲ由引物F5和引物F6組成；

所述引物F5為序列表的序列5所示的單鏈DNA分子；

所述引物F6為序列表的序列6所示的單鏈DNA分子。

2.權利要求1所述引物組合的應用，為如下（b1）至（b6）中的任意一種：

（b1）鑒別蘄蛇、烏梢蛇和金錢白花蛇；

（b2）制備用于鑒別蘄蛇、烏梢蛇和金錢白花蛇的試劑盒；

（b3）鑒定待測蛇是否為蘄蛇、烏梢蛇或金錢白花蛇；

（b4）制備用于鑒定待測蛇是否為蘄蛇、烏梢蛇或金錢白花蛇的試劑盒；

（b5）鑒定待測樣品中是否含有蘄蛇和/或烏梢蛇和/或金錢白花蛇；

（b6）制備用于鑒定待測樣品中是否含有蘄蛇和/或烏梢蛇和/或金錢白花蛇的試劑盒。

3.含有權利要求1所述引物組合的試劑盒；所述試劑盒的用途為如下（c1）或（c2）或（c3）：

（c1）鑒別蘄蛇、烏梢蛇和金錢白花蛇；

（c2）鑒定待測蛇是否為蘄蛇、烏梢蛇或金錢白花蛇；

（c3）鑒定待測樣品中是否含有蘄蛇和/或烏梢蛇和/或金錢白花蛇。

4.權利要求3所述試劑盒的制備方法，包括將各條引物單獨包裝的步驟。

5.鑒別蘄蛇、烏梢蛇和金錢白花蛇的方法，為如下方法Ⅰ或方法Ⅱ；

所述方法Ⅰ包括如下步驟：提取待測蛇基因組DNA；以所述基因組DNA為模板，采用權利要求1所述的引物組合進行PCR擴增，如果擴增產物中含有349bp的DNA片段、待測蛇為蘄蛇，如果擴增產物中含有124bp的DNA片段、待測蛇為烏梢蛇，如果擴增產物中含有565bp的DNA片段、待測蛇為金錢白花蛇；

所述方法Ⅱ包括如下步驟：檢測待測蛇的基因組DNA中是否含有權利要求1所述的引物組合中的引物對Ⅰ的靶序列、引物對Ⅱ的靶序列或引物對Ⅲ的靶序列；如果所述基因組DNA中含有引物對Ⅰ的靶序列、待測蛇為蘄蛇，如果所述基因組DNA中含有引物對Ⅱ的靶序列、待測蛇為烏梢蛇，如果所述基因組DNA中含有引物對Ⅲ的靶序列、待測蛇為金錢白花蛇；

所述引物對Ⅰ由引物F1和引物F2組成；

所述引物F1為序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；

所述引物F2為序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；

所述引物對Ⅱ由引物F3和引物F4組成；

所述引物F3為序列表的序列3所示的單鏈DNA分子；

所述引物F4為序列表的序列4所示的單鏈DNA分子；

所述引物對Ⅲ由引物F5和引物F6組成；

所述引物F5為序列表的序列5所示的單鏈DNA分子；

所述引物F6為序列表的序列6所示的單鏈DNA分子；

所述引物對Ⅰ的靶序列為序列表的序列7所示的單鏈DNA分子；

所述引物對Ⅱ的靶序列為序列表的序列8所示的單鏈DNA分子；

所述引物對Ⅲ的靶序列為序列表的序列9所示的單鏈DNA分子。