[發明專利]一種高效的虎奶菇多孢分離方法以及使用的多孢分離裝置

在審

• 申請號: 201611188834.5
• 申請日: 2016-12-21
• 公開（公告）號: CN106612982A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: 張一帆;楊小兵;謝意珍
• 申請（專利權）人: 廣東省微生物研究所;廣東粵微食用菌技術有限公司
• 主分類號: A01D93/00
• 分類號: A01D93/00
• 代理公司: 廣州弘邦專利商標事務所有限公司44236
• 代理人: 張釔斌

技術領域

本發明涉及一種多孢分離方法，尤其涉及一種高效的虎奶菇多孢分離方法以及使用的多孢分離裝置。

背景技術

食用菌品種菌種質量的好壞是決定其產量高低和質量優劣的根基，也是食用菌種植效益的最直接影響因子。傳統的菌種質量保持方法在實踐中由于保藏基質、保藏環境以及繼代操作等諸多因素，造成了部分菌種在栽培應用中，表現出生產性能的退化。因此，不少制種和生產單位開始大量應用新分離種作為原始種進行擴繁和生產。

多孢分離指采用分離多孢子獲得純培養物的方法，是食用菌育種的主要方法之一。多孢分離的效果例如孢子萌發率、次生菌絲菌落密度等直接影響優勢菌株篩選效果。

關于菌種多孢分離的研究較多，目前公開及使用的主要以無菌紙收集法和鉤子懸空方法為主，在公開的中國專利申請CN1786149A中，公開了一種傘菌孢子的野外分離方法，將子實體置于無菌紙上，然后將吸有清水的吸水紙貼于器皿內壁，器皿罩住無菌紙，孢子會彈射到無菌紙上，形成孢子印，該方法的主要缺點在于孢子的接觸介質與孢子的接觸面積大，受污染風險高；在公開的中國專利申請CN104396572A中，公開了一種冬蟲夏草菌種孢子的分離提純復壯方法，其中分離采用鉤子懸空方法，包括在試管塞下端錘入一個小鉤，在無菌條件下將菌種的子座下端倒掛于試管塞的小鉤上，使子座尖端部向下，將掛好子座的試管塞塞入斜面試管；該方法的主要缺點在于一方面只能用于較小的子實體，另一方面，每一子實體只能收集于一個培養試管，效率不高。

基于以上情況，需要研究一種高效的、適合于大型子實體且污染風險小的多孢分離方法及裝置。

發明內容

一方面，本發明提供一種高效的虎奶菇多孢分離方法。

一種高效的虎奶菇多孢分離方法，包括：

將多孢分離裝置封口并滅菌，采收菌蓋直徑6-8cm，箘褶外露而菌蓋邊緣未完全外翻的虎奶菇子實體，切除菌柄，消毒菌蓋表面，打開隔離容器，箘褶朝下地把將菌蓋放置于懸空放置裝置，重新蓋上隔離容器并封口，每隔8-10小時更換一次收集裝置；

所述多孢分離裝置包括：隔離容器，以及隔離容器中的懸空放置裝置，所述懸空放置裝置下方設置有收集裝置。

優選的，所述消毒菌蓋表面時不要接觸箘褶部位。

優選的，每一次子實體可收集20-24小時。

優選的，當重新蓋上隔離容器后，在隔離容器封口處噴施酒精后，再重新封口。

優選的，所述收集裝置中還有培養基，所述培養基的組分按照重量百分比包括：蛋白胨0.4％-0.5％，酵母浸出粉0.1％-0.2％，葡萄糖1.5％-2％，磷酸氫二鉀0.05％-0.1％，硫酸鎂0.03％-0.05％，其余為水。

進一步優選的，上述培養基的pH為6.5。

優選的，所述收集裝置中還有培養基，所述培養基的組分按照重量百分比包括：蛋白胨0.5％，酵母浸出粉0.2％，葡萄糖2％，磷酸氫二鉀0.1％，硫酸鎂0.05％，其余為水，所述培養基的pH 6.5。

優選的，將收集裝置取出并封口后，在26℃培養箱中避光培養，所述多孢培養的孢子萌發率高，次生菌絲的菌落均勻。

優選的，所述隔離容器包括燒杯；所述懸空放置裝置包括蒸架；所述收集裝置包括培養皿。

優選的，更換子實體后，重新清洗、封口、滅菌多孢分離裝置再使用。

另一方面，本發明還提供一種高效的虎奶菇多孢分離裝置，用于上述高效的虎奶菇多孢分離方法。

一種高效的虎奶菇多孢分離方法使用的多孢分離裝置，所述多孢分離裝置包括：隔離容器，以及隔離容器中的懸空放置裝置，所述懸空放置裝置下方設置有收集裝置。

優選的，所述懸空放置裝置為直徑10-11厘米、腳高7-8厘米的蒸架。

采用本發明的虎奶菇多孢分離方法分離得到的孢子經過培養后，可以得到大量半透明匍匐狀初生菌絲體菌落，初生菌絲融合后，會出現白色毛氈狀菌落，這些菌落可以用于后續的分離、鑒定或培養等。

采用本發明收集的虎奶菇孢子，收集的孢子的孢子萌發率高，次生菌絲的菌落均勻，從而有助于后續的優勢菌株篩選。。

與現有技術的無菌紙收集法相比，本發明的虎奶菇多孢分離方法孢子的不與中間介質接觸，直接收集到培養基中培養，減少污染風險；與現有技術的鉤子懸空方法相比，本發明可以適用于較大型的子實體，而且可以多次更換收集裝置，每一子實體可以實現多次收集，提高效率。