[發明專利]一種提高傳染性法氏囊病病毒效價穩定性的方法

有效

• 申請號: 201611182529.5
• 申請日: 2016-12-20
• 公開（公告）號: CN106591243B
• 公開（公告）日: 2019-08-27
• 發明（設計）人: 張立霞
• 申請（專利權）人: 天津瑞普生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N7/02
• 代理公司: 天津合志慧知識產權代理事務所(普通合伙) 12219
• 代理人: 陳松

本發明提供了一種提高傳染性法氏囊病病毒效價穩定性的方法，該技術方案以去除作為抗原制備的初始毒種中所存在的支原體或雞網狀內皮組織增生癥病毒為目的，先將毒種回歸雞體，經傳代后接種于CEF細胞馴化，而后再通過蝕斑克隆法純化病毒；在此基礎上，本發明針對傳染性法氏囊病病毒的自身特性以及外源病毒的特點設計了具體的操作工藝。本發明利用雞體回歸和蝕斑克隆法純化病毒，去除了原有疫苗株存在的外源病毒污染，獲得了病毒增殖力強、純度高、效價穩定性好的純凈疫苗株。利用本發明制備的半成品不同批次間病毒效價浮動為10^0.1～0.3TCID₅₀/0.1mL，提高了病毒效價的準確性和穩定性。

技術領域

本發明涉及生物制品制備技術領域，進一步涉及以提升抗原效價穩定性為目的工藝改良，具體涉及一種提高傳染性法氏囊病病毒效價穩定性的方法。

背景技術

傳染性法氏囊病是由傳染性法氏囊病病毒引起的一種急性、高度接觸性傳染病。該病現已呈現全球性流行，一直威脅著禽業的發展，特別是超強毒株的出現，使得該病的防控形勢更加嚴峻。疫苗的接種是防控該病的一種有效途徑。

疫苗毒株的質量決定著疫苗的有效性和疫苗制備過程的簡便性。因此抗原的純化至關重要，現有技術中以疫苗生產為目的的抗原制備過程中，抗體效價隨代次和生產批次的差異而嚴重不穩定的現象時有發生。針對這一問題現有技術研究發現，除了工藝操作的偏差之外，初始毒株遭到其他外源病毒的污染是重要的原因。若疫苗毒株存在支原體、雞網狀內皮組織增生癥等的污染，則會大大影響病毒的增殖，從而使病毒的效價呈現嚴重的不穩定性，給病毒的增殖和疫苗的制備帶來極大的不便。因此，如果能在疫苗制備前先對抗原進行前處理以保證沒有外源病毒的污染，則有望顯著疫苗效價的穩定性。

發明內容

本發明旨在針對現有技術的技術缺陷，提供一種提高傳染性法氏囊病病毒效價穩定性的方法，以解決現有技術中疫苗效價不穩定的技術問題。

本發明要解決的另一技術問題是現有技術中因初始毒株中污染有其他外源病毒而導致疫苗效價不穩定。

本發明要解決的再一技術問題是現有技術中因初始毒株中污染有支原體或雞網狀內皮組織增生癥病毒而導致疫苗效價不穩定。

為實現以上技術目的，本發明采用以下技術方案：

一種提高傳染性法氏囊病病毒效價穩定性的方法，包括以下步驟：

1)取傳染性法氏囊病病毒接種15～30日齡SPF雞，72～96小時后剖檢取出法氏囊組織，研磨，對研磨液進行10^-1～10^-3倍稀釋；

2)以步驟1)所得產物作為步驟1)所述傳染性法氏囊病病毒，再重復步驟1)2～4次，得到病毒組織液；

3)取以9～11日齡的SPF雞胚所制備的CEF細胞，以2×10⁶～3.0×10⁶細胞量/mL的接種量接種至含有5～10％(v/v)胎牛血清的M199培養基中培養過夜；

4)取步驟2)所得的病毒組織液稀釋10^-2～10^-3倍后接種于步驟3)所得產物中，培養48～72小時后收獲病毒液；

5)以步驟4)所得產物作為步驟4)所述病毒組織液，再重復步驟4)1～2次，得到CEF馴化種毒；

6)對步驟5)所述CEF馴化種毒進行蝕斑純化。

作為優選，步驟1)中接種前先對傳染性法氏囊病病毒進行10^-1～10^-3倍稀釋，而后再接種。

作為優選，步驟3)中所述培養及步驟4)中所述培養，均是在37℃下進行的。