[發(fā)明專利]一種提高西瓜未授粉子房胚狀體誘導(dǎo)率方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611181299.0
• 申請(qǐng)日: 2016-12-20
• 公開（公告）號(hào): CN106688888B
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁志懷;閔子揚(yáng);阮萬輝;張屹;肖姬玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖南省西瓜甜瓜研究所
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 荊門市首創(chuàng)專利事務(wù)所 42107
• 代理人: 王鋒

本發(fā)明提供了一種提高西瓜未授粉子房胚狀體誘導(dǎo)率方法，該方法包括：在接種前，進(jìn)行春季西瓜未授粉子房的選樣和預(yù)處理；所述選樣為選擇留取全部果柄的西瓜未授粉子房；所述預(yù)處理的步驟為：（1）將選樣所得未授粉子房置于濃度為0.02 mg/ml的TDZ中處理5?10 min；（2）將步驟（1）所得物置于10℃下處理2 d，或置于15?20℃下處理1?2 d。本發(fā)明可以大幅度的提高春季西瓜未授粉子房胚狀體的誘導(dǎo)率，最高可達(dá)15.9%，同時(shí)，所得胚狀體的生長(zhǎng)狀況良好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于作物培育領(lǐng)域，具體涉及一種提高春季西瓜未授粉子房胚狀體誘導(dǎo)率方法。

背景技術(shù)

西瓜(Citrullus lanatus)是葫蘆科重要的蔬菜作物之一，具有豐富的營(yíng)養(yǎng)和保健功能從而深受消費(fèi)者喜愛，中國(guó)作為西瓜的生產(chǎn)和消費(fèi)大國(guó)，其產(chǎn)量占世界總產(chǎn)量的60%以上，市場(chǎng)前景廣闊。但是，我國(guó)西瓜育種水平相對(duì)滯后，品種類型無法完全滿足市場(chǎng)需求，因此提高我國(guó)西瓜育種水平、增強(qiáng)西瓜產(chǎn)業(yè)國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力具有重要意義。

單倍體植株進(jìn)行加倍處理后獲得雙單倍體(DH)株系對(duì)于加速育種進(jìn)程、創(chuàng)新種質(zhì)資源、遺傳圖譜構(gòu)建等方面均具有重要意義。人們嘗試用多種方法獲得單倍體，通常采用的有離體雄核培養(yǎng)和離體雌核培養(yǎng)，其中以花粉或花藥為外植體的離體雄核培養(yǎng)研究較為深入，應(yīng)用也更加普遍，特別是在十字花科和禾本科作物上。但是，在葫蘆科作物上通過離體雄核培養(yǎng)來誘導(dǎo)單倍體的形成非常困難，直至目前還沒有建立起較為成熟的誘導(dǎo)體系，因此研究較多的是以未授粉子房或胚珠為外植體的離體雌核培養(yǎng)。

離體雌核培養(yǎng)過程中再生植株的產(chǎn)生方式有兩種，一種是誘導(dǎo)形成愈傷組織后再分化產(chǎn)生芽，最后形成完整再生植株；另一種是以胚狀體發(fā)育途徑直接形成再生植株。相關(guān)研究表明，愈傷組織途徑形成的再生植株大部分起源于體細(xì)胞，而以胚狀體發(fā)育途徑產(chǎn)生的再生植株中單倍體植株的比例顯著高于以愈傷組織途徑形成的再生植株。這提醒我們?cè)谶M(jìn)行西瓜未授粉子房離體培養(yǎng)以創(chuàng)制單倍體植株的過程中，提高胚狀體的誘導(dǎo)率是一個(gè)需要解決的關(guān)鍵問題。

雖然現(xiàn)有的研究可以將秋季西瓜未授粉子房胚狀體的誘導(dǎo)率提高到20%左右，然而，對(duì)于春季西瓜未授粉子房胚狀體，現(xiàn)有技術(shù)所獲得的誘導(dǎo)率多在5 %以下，嚴(yán)重的限制了相關(guān)研究和產(chǎn)業(yè)的發(fā)展進(jìn)程。

因此，以春季西瓜未授粉子房為研究對(duì)象進(jìn)行探究，力爭(zhēng)找到提高春季西瓜未授粉子房胚狀體誘導(dǎo)率的方法，以期能夠加速西瓜單倍體育種進(jìn)程，為我國(guó)西瓜種質(zhì)資源創(chuàng)新、新品種選育、基因工程相關(guān)研究提供幫助，是本領(lǐng)域亟待解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的在于提供一種提高春季西瓜未授粉子房胚狀體誘導(dǎo)率方法，該方法包括：

在接種前，進(jìn)行春季西瓜未授粉子房的選樣和預(yù)處理；

所述選樣為選擇留取全部果柄的未授粉子房；

所述預(yù)處理的步驟為：

（1）將選樣所得未授粉子房置于濃度為0.02 mg/ml的TDZ中處理5-10 min；

（2）將步驟（1）所得物置于10℃下處理2 d，或置于15-20℃下處理1-2 d。

所述西瓜未授粉子房為開花前一天的西瓜未授粉子房。

優(yōu)選的，所述預(yù)處理步驟（1）的處理時(shí)間為10 min。

優(yōu)選的，所述預(yù)處理步驟（2）為：將步驟（1）所得物置于10℃下處理2 d，或置于15℃下處理1-2 d，或置于20℃下處理1 d。更優(yōu)選的，所述預(yù)處理步驟（2）為：將步驟（1）所得物置于15℃下處理2 d。

所述方法還包括：在接種前切除經(jīng)過預(yù)處理的未授粉子房的外表皮，然后進(jìn)行切片，切片厚度為1 mm，再進(jìn)行消毒處理。優(yōu)選的，所述消毒處理為：用3%的次氯酸鈉溶液消毒2 min。