[發明專利]抗偽狂犬病毒豬源化單抗制備方法及其應用

在審

• 申請號: 201611180957.4
• 申請日: 2016-12-20
• 公開（公告）號: CN108203716A
• 公開（公告）日: 2018-06-26
• 發明（設計）人: 包晟;謝亦武;曹天福;包世啟
• 申請（專利權）人: 深圳市雅臣愛己生物工程有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/13;C07K16/46;C07K16/08;A61K39/42;A61P31/22;A23K50/30;A23K20/147
• 代理公司: 深圳市順天達專利商標代理有限公司 44217
• 代理人: 郭偉剛

本發明涉及基因工程重組抗豬偽狂犬病毒豬源化單抗制備及其應用，具體涉及抗偽狂犬病毒豬源化單抗制備方法及其應用；本發明篩選各種能穩定分泌抗偽狂犬病毒(PRV)糖蛋白單克隆抗體的陽性雜交瘤細胞，分泌單克隆抗體，擴大培養后富集、純化、測序，設計相應的特異性引物，將其豬源化，以病毒類基因載體或非病毒基因載體(包括質粒DNA、微環DNA等)進行克隆，將不同的豬源化單抗采用昆蟲細胞或CHO細胞發酵大規模生產豬源化單抗蛋白，或者直接將上述含豬源化單抗基因載體輸入豬只。通過給豬注射或飼喂豬以及滴鼻和噴霧等方式，采用這種抗偽狂犬病毒豬源化單抗中和偽狂犬病毒，以被動免疫方式凈化偽狂犬病陽性豬場以及預防和治療豬偽狂犬病。

技術領域

本發明涉及基因工程技術在預防和治療豬偽狂犬病以及凈化豬偽狂犬病陽性場中的應用，更具體地說，涉及抗偽狂犬病毒豬源化單抗制備方法及其應用。

背景技術

偽狂犬病(PR)是當前我國豬場重大烈性傳染病，它對養豬業危害極大，常在豬群中爆發流行，給養豬業造成嚴重的經濟損失。豬只感染偽狂犬病后，偽狂犬病毒會在鼻咽上皮和扁桃體內復制并擴散至淋巴結，損害機體殺滅病原體和細胞毒素的功能，導致機體免疫抑制與免疫低下，使許多疫苗免疫失效并很容易繼發豬瘟和豬傳染性胸膜肺炎等嚴重疾病。目前，盡管大部分豬場都進行了偽狂犬疫苗免疫；但是，由于豬偽狂犬病毒會摧毀豬的免疫系統，使得接種豬偽狂犬疫苗并不能保證產生保護性抗體；這就造成世界各國豬群的偽狂犬病野毒感染率普遍高居不下，嚴重影響豬的生產性能。根據海博萊2011年、2012年、2013年對我國19省市568個豬場監測結果，種豬場偽狂犬病陽性率高達在41.7-62.3％，比國外一些落后國家還高，雄居世界之首，號稱我國養豬界的“癌癥”；從而，嚴重影響我國養豬業的經濟效益。盡管豬偽狂犬病毒(PRV)可以感染除高等靈長類動物和人以外的幾乎所有哺乳動物以及來自溫血和冷血動物的各種培養細胞；但是，對豬以外的其他動物均為致死儲存庫的宿主,表明從豬群中消滅豬偽狂犬病毒(PRV)就可最終根除偽狂犬病。鑒于偽狂犬病在我國已呈全國性流行,是影響我國養豬業發展最為嚴重的傳染病之一,隨著世界上越來越多的國家根除偽狂犬病,根除計劃也將成為我國應對偽狂犬病發生的必然措施。

迄今為止，我國和全球其他國家都是沿用注射疫苗(主動免疫)加上大量淘汰偽狂犬病陽性豬的傳統方法來解決這個問題。如前所述，豬偽狂犬病毒會破壞豬體內的巨噬細胞，進而影響整個免疫系統，造成受其感染的豬既使注射疫苗也不一定產生免疫力，這種病毒所獨有的這個致命特點也是其禍害難于消除的根源。正是由于這一點，采用主動免疫方法對偽狂犬病陽性豬場進行凈化，不但實際成效很差，而且必須結合強制淘汰陽性種豬，勢必產生巨大的經濟損失。據國內外報道，要花費10年左右的漫長時間。美國于1989年開始啟動長達17年的全國性凈化計劃，也只能算取得階段性成果；其中造成的經濟損失難于估量。在我國，政府部門并沒有如歐美國家那樣就淘汰陽性種豬給予豬農補貼；在這種情況下，強制淘汰陽性種豬是很難實施的。眾所周知，不大量淘汰偽狂犬病陽性豬，僅僅依靠注射疫苗是不可能根除偽狂犬病的。

基于根除偽狂犬病的總體戰略安排，國務院辦公廳關于印發國家中長期動物疫病防治規劃(2012—2020年)的通知(國辦發〔2012〕31號)中明確要求到2020年全國所有種豬場都必須達到豬偽狂犬病凈化標準，詳見通知中列表：

種畜禽重點疫病凈化考核標準

根據國務院辦公廳通知的精神，我國農業部最近明確要求全國所有種豬場盡快實現豬偽狂犬病毒零陽性，其中廣東省農業廳已率先下文要求全省所有種豬場在2019年前必須達標，屆時未達標的養豬場將被吊銷營業執照；其他省市也都相繼出臺了限期達標的政策和法令。殘酷的現實是，國務院辦公廳通知中規定要求“全國所有種豬場達到凈化標準”的四種豬疫病中，唯有豬偽狂犬病最難實現的。如果還是繼續沿用常規方法進行凈化，絕大多數種豬場在短期內是完全不可能達到農業部要求的。因此，盡快攻克豬偽狂犬病陽性種豬場凈化的難關，大幅度降低偽狂犬病的發病率以提高養豬經濟效益，已成為擺在我國養豬業和畜醫界面前的一個迫在眉睫的任務！