[發明專利]AR信號通路抑制劑及其應用

在審

• 申請號: 201611174513.X
• 申請日: 2016-12-19
• 公開（公告）號: CN106727452A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 房世平;秦國鵬
• 申請（專利權）人: 慶陽敦博科技發展有限公司
• 主分類號: A61K31/06
• 分類號: A61K31/06;A61P35/00;C07C205/22
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技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及一種AR信號通路抑制劑及其應用。

背景技術

雄激素在男性的一生中都具有非常重要的生理作用，雄激素的作用由雄激素受體(AR)介導，研究表明，AR信號通路的異常與前列腺癌(PCa)、良性前列腺增生(BPH)、肯尼迪病(Kennedy disease)、男性不育、雄激素不敏感征(AIS)以及男性乳癌等疾病的發生、發展有密切的關系，因此，AR信號通路的分子組成、數量、結構、功能以及與其它信號通路的聯系一直是泌尿外科領域的研究熱點。

前列腺癌發病機制的學說眾多，其中“基質上皮間串擾”(crosstalk between stroma-epithelium)在前列腺生長發育及病變過程中的作用已經得到學界公認。前列腺基質和上皮相互作用在前列腺疾病發生發展中起著十分重要的作用。前列腺為雄激素依賴性器官，AR信號系統對于前列腺癌的發生發展起著非常重要的作用，基質細胞AR通過調節相關細胞因子的變化影響前列腺上皮的惡變及轉移。基質微環境中的可溶性細胞因子在基質上皮間串擾中發揮著重要的作用，可溶性細胞因子與相應受體結合后可以與其他信號分子相互作用(細胞外基質、整合素)，一些細胞因子可以與雄激素及雄激素受體相互作用，這些協同作用可能引發前列腺組織癌變、進展以及局部腫瘤生長和遠處轉移。因此，充分認識可溶性細胞因子與AR通路之間的相互作用，對我們研究前列腺癌的發病機制有著重要的作用，以AR為靶點的內分泌治療將是前列腺癌的一種重要的臨床治療方式。

發明內容

本發明的目的之一是提供一種AR信號通路抑制劑，所述抑制劑在人細胞中具有抗雄活性，能夠抑制雄激素依賴的細胞增殖，降低AR的下游靶向基因的表達；所述抑制劑能夠與HSP90的分子伴侶FKBP51蛋白口袋穩定結合，與FKBP51相互作用的氨基酸殘基主要是疏水殘基并且與AR相互做用的位點是相互重疊的。

所述AR信號通路抑制劑是化合物對硝基酚(PNP)，其結構式如下：

本發明的另一目的是提供上述AR信號通路抑制劑的用途，通過實驗證明了以上所示信號通路抑制劑能夠用于制備治療與AR信號通路異常激活有關的腫瘤藥物。

上述的信號通路抑制劑及其有機鹽或無機鹽在制備治療與AR信號通路異常激活有關的腫瘤藥物、制備治療肯尼迪病的藥物或制備AR信號通路抑制劑中的用途。所述的腫瘤為前列腺癌。

本發明還提供了藥物組合物，是以上述信號通路抑制劑及其有機鹽或無機鹽添加藥學上可以接受的輔助性成分制備而成的。該藥物組合物具有抑制AR信號通路的作用。

本發明還提供了篩選改善或治療前列腺癌的潛在物質的方法，包括以下步驟：

⑴用候選物質處理包含AR信號通路的前列腺癌細胞體系；

⑵通過實時定量PCR實驗檢測AR調控的五種基因PSA、FKBP51、KLK2、TMPRSS2、S100P在存在或者不存在候選物質的條件下的基因轉錄水平的表達，使用DHT激活AR信號通路，其中，不存在候選物質的條件為對照組，存在候選物質的條件為測試組，若測試組中AR調控的全部五種基因的表達量均低于對照組的，則表明該候選物質是改善或治療前列腺癌的潛在物質。

本發明的有益技術效果：本發明首次揭示了化合物對硝基酚在人細胞中具有抗雄活性，能夠抑制雄激素依賴的細胞增殖，降低AR的下游靶向基因的表達，通過實驗證明了對硝基酚對AR信號通路有抑制作用，可用于制備前列腺癌的藥物。本發明為前列腺癌的治療提供了一種新的選擇。

附圖說明

圖1、前列腺癌細胞LNCaP和22Rv1作為體內模型檢測PNP在人源細胞的抗雄活性

其中，■：LNCaP細胞；●：22Rv1細胞；用MTT法檢測細胞活性(cell viability)。

圖2、PNP通過FKBP51蛋白抑制AR活性

LNCaP細胞在血清饑餓處理后加入30μM的PNP和1nM DHT孵育12小時，采用實時定量RT-PCR檢測FKBP51(A)，PSA(B)，KLK2(C)，S100P(D)，TMPRSS2(E)表達水平，相對表達水平數據用三次實驗平均值±標準誤差表示，***p<0.001。

圖3、(A)不同濃度PNP處理FKBP的熒光光譜

a：未配合的FKBP51作為陰性對照；b-g：對用10、20、40、60、80、100μM的硝基苯酚分別處理FKBP51，最后的熒光光譜表示對硝基苯酚的固有熒光強度