[發(fā)明專利]一種巖藻多糖在制備PC?12細(xì)胞或MKN?45細(xì)胞活性抑制劑中的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611172183.0
• 申請(qǐng)日: 2016-12-17
• 公開（公告）號(hào): CN106727668A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王鴻;張甲生;嚴(yán)銀春;陳小春
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江工業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K31/737
• 分類號(hào): A61K31/737;A61P35/00;A61P39/06;C08B37/00
• 代理公司: 杭州天正專利事務(wù)所有限公司33201
• 代理人: 黃美娟,李世玉

(一)技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種巖藻多糖在抗腫瘤中的應(yīng)用，特別涉及一種巖藻多糖在制備PC-12細(xì)胞或MKN-45細(xì)胞活性抑制劑中的應(yīng)用。

(二)背景技術(shù)

海洋藻類作為一種新的生物活性物質(zhì)的來(lái)源正在迅速被研究，我國(guó)藻類資源十分豐富，特別是褐藻(Phaeophyta)資源，是海藻生產(chǎn)和消費(fèi)大國(guó)。褐藻(Phaeophyta)是海洋藻類中的第二大種群，分為25個(gè)屬，大約有1500種，是生長(zhǎng)在海洋中的低等植物，在很多國(guó)家，褐藻(Phaeophyta)如墨角藻(Fucus)，海帶(Laminaria japonica)，羊棲菜(Hizikiafusifarme)等作為食品來(lái)食用。褐藻中含有的多糖成分，如褐藻膠，巖藻多糖，褐藻淀粉等，均已在醫(yī)藥原料中廣泛的應(yīng)用。

巖藻多糖(Fucoidan)是Kylin在1913年首次從掌狀海帶中提取的，它是褐藻中所固有的細(xì)胞間多糖，存在于細(xì)胞壁基質(zhì)中。研究表明巖藻多糖具有廣泛的生物活性如抗氧化，抗腫瘤，抗凝血，抗病毒等。巖藻多糖不僅能夠增強(qiáng)人體免疫力，還可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，被認(rèn)為是重要的自由基清除劑和抗氧化劑，巖藻多糖在功能性食品和藥品行業(yè)具有很大的發(fā)展?jié)摿Α?/p>

巖藻多糖是以L-巖藻糖和硫酸基為主要特征的一類水溶性多糖，并伴有其他單糖(如半乳糖、甘露糖、木糖、葡萄糖醛酸、阿拉伯糖、鼠李糖)的雜多糖。巖藻多糖結(jié)構(gòu)十分復(fù)雜，一方面不同褐藻的巖藻多糖，化學(xué)組成不盡相同，除了主要成分巖藻糖、硫酸基、其他單糖(甘露糖、半乳糖、葡萄糖等)以及糖醛酸外，有些還具有乙酰基和蛋白質(zhì)；另一方面不同種褐藻中的巖藻多糖的結(jié)構(gòu)也不相同，并且由不同提取方法得到的巖藻多糖分子量和結(jié)構(gòu)也會(huì)不同。褐藻中的巖藻多糖，單糖組成以L-巖藻糖為主，L-巖藻糖通過(guò)α-(1→2)，α-(1→3)或α-(1→4)連接構(gòu)成主鏈，主鏈除了由巖藻糖構(gòu)成還含有其他單糖，并且有較多的分支。硫酸基主要結(jié)合在C-2或C-4位上，平均每?jī)蓚€(gè)巖藻糖基含有一個(gè)硫酸基。

(三)發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一種巖藻多糖在制備PC-12細(xì)胞或MKN-45細(xì)胞活性抑制劑中的應(yīng)用，本發(fā)明從海帶中獲得純度高達(dá)71％-92％巖藻多糖的方法，提供測(cè)定巖藻多糖抗氧化及抗腫瘤活性的方法。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

本發(fā)明提供一種巖藻多糖在制備PC-12細(xì)胞或MKN-45細(xì)胞活性抑制劑中的應(yīng)用。

進(jìn)一步，所述巖藻多糖按如下方法制備：將干海帶粉與溶劑混合，在60-100℃浸提1-5h，將提取液5000-10000r/min離心，取上清液50℃-70℃減壓濃縮至1/2-1/15體積(優(yōu)選濃縮至1/10)，然后加1M CaCl₂水溶液至無(wú)沉淀產(chǎn)生，攪拌4h，離心，取上清液，加入無(wú)水乙醇至乙醇體積濃度為60-90％(優(yōu)選75％)，攪拌，在4℃下靜置過(guò)夜，離心，沉淀凍干，得粗巖藻多糖；將粗巖藻多糖用純水制成質(zhì)量濃度為2％(m/m)的溶液，上樣DEAE-52纖維素陰離子交換柱(3.2cm×22cm)，分別用純水，1.0M NaCl水溶液，2.0M NaCl水溶液進(jìn)行洗脫，分別收集三種洗脫餾分的流出液，經(jīng)透析(14KDa)，凍干(6-10小時(shí))，獲得巖藻多糖；所述溶劑為體積濃度95％乙醇水溶液或純水；所述溶劑體積用量以干海帶粉質(zhì)量計(jì)為25-50ml/g。

進(jìn)一步，優(yōu)選所述溶劑為純水。

進(jìn)一步，優(yōu)選所述溶劑體積用量以干海帶粉質(zhì)量計(jì)為40ml/g；所述浸提條件為90℃浸提3h。

本發(fā)明取巖藻多糖的原料可以是人工養(yǎng)殖的海帶，也可以是野生褐藻馬尾藻(Scagassum)。

本發(fā)明所述純水是指去離子水。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明有益效果主要體現(xiàn)在：

1)采用本發(fā)明的制備方法制取巖藻多糖作為抗腫瘤(PC-12，MKN-45)及抗氧化劑，具備純度高(71％-92％)，操作簡(jiǎn)單，反應(yīng)條件易于控制、工藝成本低等特點(diǎn)。

2)本發(fā)明的制備方法制取分離得到的巖藻多糖(FCSP，F(xiàn)CSP-1，F(xiàn)CSP-2，F(xiàn)CSP-3)，其抗腫瘤(PC-12，MKN-45)抑制率要高于市售巖藻多糖(純度80％，來(lái)自于陜西天然原料匯)對(duì)PC-12，MKN-45的抑制率。

3)采用本發(fā)明制備的巖藻多糖作為抗腫瘤(PC-12，MKN-45)及抗氧化劑，也可以用于食品添加劑產(chǎn)品可制成粉劑、水劑、針劑等劑型。

(四)附圖說(shuō)明